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  • 2016

    7-1

    在細(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)過(guo)程中(zhong)會(hui)出現(xian)這樣(yang)或(huo)(huo)那樣(yang)的(de)問題(ti),從細(xi)胞(bao)(bao)生長(chang)角(jiao)度(du)來(lai)說,針(zhen)對細(xi)胞(bao)(bao)不(bu)貼壁、生長(chang)緩慢、生長(chang)不(bu)好,甚至(zhi)死(si)亡的(de)原(yuan)因.一、培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)(bao)不(bu)貼壁可能(neng)原(yuan)因:●胰蛋白酶消(xiao)化過(guo)度(du)●支(zhi)(zhi)(zhi)原(yuan)體污(wu)染(ran)●培(pei)養(yang)基(ji)pH值過(guo)堿(NaHCO3分(fen)解)●細(xi)胞(bao)(bao)老化●接(jie)種(zhong)細(xi)胞(bao)(bao)起始(shi)濃度(du)太低(di)或(huo)(huo)太高解決方法:●縮短胰蛋白酶消(xiao)化時間或(huo)(huo)降低(di)胰蛋白酶濃度(du)●分(fen)離培(pei)養(yang)物,檢測(ce)支(zhi)(zhi)(zhi)原(yuan)體。清(qing)潔(jie)支(zhi)(zhi)(zhi)架或(huo)(huo)培(pei)養(yang)箱。如發現(xian)支(zhi)(zhi)(zhi)原(yuan)體污(wu)染(ran),丟棄培(pei)養(yang)物。●使用無菌醋酸溶液調整pH值或(huo)(huo)充入無菌CO2●啟用新的(de)保種(zhong)細(xi)胞(bao)(bao)●調節*接(jie)種(zhong)細(xi)胞(bao)(bao)濃度(du)二、懸浮細(xi)胞(bao)(bao)成簇可能(neng)原(yuan)因:●...

  • 2016

    6-30

    T淋巴(ba)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)轉(zhuan)(zhuan)化(hua)實驗的(de)基本原理T細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)在(zai)體外培(pei)養時,受(shou)到非特異性(xing)有(you)絲(si)(si)分(fen)裂原(如PHA、ConA)刺激(ji)后,可(ke)(ke)出現(xian)(xian)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)體積增(zeng)大,代(dai)謝旺盛,蛋白和核酸(suan)合成增(zeng)加,即向淋巴(ba)母細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)轉(zhuan)(zhuan)化(hua).淋巴(ba)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)轉(zhuan)(zhuan)化(hua)率(lv)的(de)高低(di)可(ke)(ke)以(yi)反映(ying)機體的(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)免疫(yi)水平(ping)(ping),因(yin)(yin)此可(ke)(ke)作為測(ce)定機體免疫(yi)功能的(de)指標(biao)之(zhi)一.T細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)在(zai)體外培(pei)養時,受(shou)到非特異性(xing)有(you)絲(si)(si)分(fen)裂原(如PHA、ConA)刺激(ji)后,可(ke)(ke)出現(xian)(xian)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)體積增(zeng)大,代(dai)謝旺盛,蛋白和核酸(suan)合成增(zeng)加,即向淋巴(ba)母細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)轉(zhuan)(zhuan)化(hua).淋巴(ba)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)轉(zhuan)(zhuan)化(hua)率(lv)的(de)高低(di)可(ke)(ke)以(yi)反映(ying)機體的(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)免疫(yi)水平(ping)(ping),因(yin)(yin)此可(ke)(ke)作為測(ce)定機體免疫(yi)功能的(de)指標(biao)之(zhi)...

  • 2016

    6-27

    DNA螢光(guang)染色(se)(se)法·原(yuan)理︰利用螢光(guang)染劑(bisbenzimide,Hoechst33258)偵(zhen)測支原(yuan)體(ti)(ti)(ti)污染。此(ci)染劑會(hui)結合到DNA之Adenosine-Thymidine(A-T)rich區(qu)域,因為(wei)支原(yuan)體(ti)(ti)(ti)之DNA中A-T含量占(zhan)多數(shu)(55~80%),所以(yi)可(ke)將其(qi)染色(se)(se)而(er)偵(zhen)測。被支原(yuan)體(ti)(ti)(ti)污染之細(xi)胞經(jing)染色(se)(se)后(hou),在細(xi)胞核(he)外(wai)與細(xi)胞周圍可(ke)看到許多大(da)小(xiao)均一(yi)之螢光(guang)小(xiao)點,即為(wei)支原(yuan)體(ti)(ti)(ti)之DNA,證明有支原(yuan)體(ti)(ti)(ti)之污染。·特(te)點︰簡單、經(jing)濟與靈敏,廣泛使用,可(ke)作為(wei)例(li)行之偵(zhen)測步驟。可(ke)以(yi)偵(zhen)測不易(yi)培養之支原(yuan)體(ti)(ti)(ti),例(li)如(ru)M.hy...

  • 2016

    6-22

    細(xi)胞(bao)名稱:4T1小鼠(shu)乳(ru)腺癌細(xi)胞(bao)介紹:4T1是從410.4瘤(liu)株(zhu)中(zhong)未經誘(you)變篩(shai)得(de)的(de)6-硫鳥(niao)(niao)嘌噙(qin)抗性細(xi)胞(bao)株(zhu)。當注(zhu)射到(dao)BALB/c小鼠(shu)中(zhong)時,4T1自發產生(sheng)高轉(zhuan)移腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu),可轉(zhuan)移到(dao)肺,肝,淋(lin)巴結和(he)大(da)腦(nao),同時在注(zhu)射部(bu)位形成始(shi)發灶。誘(you)導轉(zhuan)移時不需要(yao)摘除始(shi)發灶。4T1細(xi)胞(bao)在BALB/c小鼠(shu)中(zhong)的(de)生(sheng)長與轉(zhuan)移特性與人體(ti)中(zhong)的(de)乳(ru)腺癌十分相(xiang)(xiang)近。這種腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)是人VI期(qi)乳(ru)腺癌的(de)動物(wu)模(mo)型。4T1-誘(you)導的(de)腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)在手(shou)(shou)術后及未手(shou)(shou)術情(qing)況下(xia)轉(zhuan)移的(de)動力(li)學(xue)相(xiang)(xiang)近,可以用作手(shou)(shou)術后及未手(shou)(shou)術模(mo)型。跟其(qi)他腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)模(mo)型相(xiang)(xiang)比,由于(yu)4T1的(de)抗6-硫鳥(niao)(niao)嘌噙(qin)...

  • 2016

    6-20

    細(xi)(xi)(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養板(ban)的(de)(de)(de)選(xuan)擇細(xi)(xi)(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養板(ban)依底(di)(di)部形(xing)狀的(de)(de)(de)不同可分為平底(di)(di)和(he)(he)圓底(di)(di)(U型(xing)(xing)和(he)(he)V型(xing)(xing));培(pei)(pei)養孔的(de)(de)(de)孔數(shu)有(you)6、12、24、48、96、384、1536孔等(deng);根據材質的(de)(de)(de)不同有(you)Terasaki板(ban)和(he)(he)普(pu)通細(xi)(xi)(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養板(ban)。具體(ti)選(xuan)擇時(shi)根據培(pei)(pei)養細(xi)(xi)(xi)胞(bao)的(de)(de)(de)類型(xing)(xing)、所需培(pei)(pei)養體(ti)積及(ji)不同的(de)(de)(de)實驗目的(de)(de)(de)而定(ding)。(1)平底(di)(di)和(he)(he)圓底(di)(di)(U型(xing)(xing)和(he)(he)V型(xing)(xing))培(pei)(pei)養板(ban)的(de)(de)(de)區別(bie)和(he)(he)選(xuan)擇不同形(xing)狀的(de)(de)(de)培(pei)(pei)養板(ban)有(you)不同用途。培(pei)(pei)養細(xi)(xi)(xi)胞(bao),通常是選(xuan)用平底(di)(di)的(de)(de)(de),這樣便于(yu)鏡(jing)下觀測(ce)、有(you)明確的(de)(de)(de)底(di)(di)面積、細(xi)(xi)(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養液面高度相對(dui)一(yi)(yi)致。因(yin)此做MTT等(deng)實驗時(shi),無論是貼(tie)壁和(he)(he)懸浮(fu)細(xi)(xi)(xi)胞(bao),一(yi)(yi)般選(xuan)用平底(di)(di)板(ban)。測(ce)...

  • 2016

    6-16

    細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)常(chang)用培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)及基(ji)本特(te)性1、RPMI-1640MediumRPMI-1640廣(guang)泛應(ying)用于哺(bu)乳動物、特(te)殊造血細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)、正常(chang)或惡性增生的(de)白細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao),雜(za)交瘤(liu)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)的(de)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang),是目(mu)前應(ying)用十分廣(guang)泛的(de)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)。主要用于懸浮細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)。其(qi)它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等(deng)成(cheng)淋巴(ba)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)、T細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)淋巴(ba)瘤(liu)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)以及HCT-15上皮(pi)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)等(deng)均可參考使用。2、MinimumEssentialMedium(MEM)也(ye)稱zui低(di)必需(xu)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji),它僅含有12種必需(xu)氨(an)基(ji)酸、谷(gu)氨(an)酰(xian)胺和(he)8種維(wei)生素。成(cheng)分簡單,...

  • 2016

    6-15

    夏天(tian)到了,細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)更(geng)容易(yi)被污染(ran),很(hen)多(duo)養細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)的(de)(de)朋友在(zai)這方面困惑頗(po)多(duo),今天(tian)針對(dui)貼(tie)壁生長的(de)(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)談(tan)談(tan)。在(zai)討論(lun)之前,大(da)家首先要(yao)有(you)一(yi)個(ge)概念(nian),即潔凈區,并(bing)不是沒有(you)細(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun),而是細(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)的(de)(de)數(shu)(shu)量(liang)非常少(shao),在(zai)我們(men)的(de)(de)潔凈操(cao)作臺(tai)里,并(bing)不是真(zhen)正(zheng)一(yi)個(ge)細(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)都沒有(you)的(de)(de),所以在(zai)操(cao)作的(de)(de)時(shi)候還是要(yao)盡量(liang)利索迅(xun)速(su)地完成(cheng)操(cao)作。盡量(liang)減少(shao)進入培養體系細(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)的(de)(de)數(shu)(shu)量(liang)。所以處(chu)理細(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)污染(ran)的(de)(de)重要(yao)原則就(jiu)是:無限地稀釋細(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)的(de)(de)濃度,無限地減少(shao)細(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)的(de)(de)數(shu)(shu)量(liang)!對(dui)于細(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)污染(ran)(常見為金黃(huang)色(se)葡萄球菌(jun)(jun)和大(da)腸(chang)桿菌(jun)(jun));污染(ran)處(chu)理流(liu)程1、將污染(ran)的(de)(de)培養液倒掉,轉燒瓶口,加(jia)入10m...

  • 2016

    6-12

    影響(xiang)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)生(sheng)長的(de)(de)幾點(dian)因(yin)素,摘要(yao):細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)在體外進(jin)行培養,失去了機體的(de)(de)調節(jie)和控制(zhi),因(yin)此,除滿(man)足營(ying)養的(de)(de)要(yao)求(qiu)外,還必須使細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)生(sheng)存(cun)環(huan)境晝(zhou)接近活(huo)體的(de)(de)環(huan)境.外環(huan)境的(de)(de)培養條件如溫(wen)度(du)(du)、滲透壓、酸堿度(du)(du)等均能(neng)(neng)影響(xiang)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)生(sheng)長.一、溫(wen)度(du)(du):一般哺乳類(lei)及禽(qin)類(lei)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)體外培養的(de)(de)適宜溫(wen)度(du)(du)是37~38℃.溫(wen)度(du)(du)過高(gao)或(huo)過低都(dou)會(hui)影響(xiang)到(dao)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)生(sheng)長.細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)耐受低溫(wen)的(de)(de)能(neng)(neng)力比抗熱的(de)(de)能(neng)(neng)力強,在低溫(wen)下,細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)代謝(xie)(xie)活(huo)力及核分裂降低.溫(wen)度(du)(du)低于0℃時,雖影響(xiang)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)代謝(xie)(xie),但(dan)并(bing)無傷害作(zuo)用.把細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)置(zhi)于23~25℃時,細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)仍(reng)能(neng)(neng)生(sheng)存(cun)和生(sheng)長,但(dan)速度(du)(du)減緩,不(bu)過...

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