1. 絕大部分細胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可。吸去胰(yi)酶后，殘留的那些(xie)無法計算體(ti)積的附著在(zai)細胞表(biao)面(mian)的微(wei)量(liang)胰(yi)酶在(zai)37℃一般不(bu)到2min足(zu)夠消(xiao)化細胞。對于這些細胞(bao)(bao)原則上不要用胰酶孵育細胞(bao)(bao)，連續(xu)這樣(yang)傳代(dai)，對細胞(bao)(bao)傷害很大。簡單的程序(xu)是(shi)PBS潤洗吸去，胰酶潤洗吸去，然后37℃消化。比較難消化的細胞（潤洗方法5min還不能(neng)消化），這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育。

2.細胞如何算是(shi)消化好(hao)了呢？不是細(xi)胞(bao)(bao)(bao)全(quan)部成(cheng)(cheng)間(jian)隔分(fen)布很離散的(de)(de)單個(ge)圓形(xing)才算消化好(hao)了(le)(le)(le)(le)，一(yi)般(ban)你肉眼觀察(cha)貼壁(bi)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)層，只要(yao)能(neng)移動了(le)(le)(le)(le)，多(duo)(duo)半呈(cheng)沙壯移動，其實已(yi)(yi)經可以了(le)(le)(le)(le)，很多(duo)(duo)人(ren)喜歡(huan)把(ba)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)消化或者吹打成(cheng)(cheng)*分(fen)離細(xi)胞(bao)(bao)(bao)，這(zhe)是沒(mei)有必要(yao)的(de)(de)。一(yi)般(ban)能(neng)移動了(le)(le)(le)(le)，說明細(xi)胞(bao)(bao)(bao)與培養基質(zhi)材料的(de)(de)附著(zhu)已(yi)(yi)經消失(shi)了(le)(le)(le)(le)，細(xi)胞(bao)(bao)(bao)之間(jian)的(de)(de)附著(zhu)也已(yi)(yi)經消失(shi)了(le)(le)(le)(le)，細(xi)胞(bao)(bao)(bao)已(yi)(yi)經獨立分(fen)布了(le)(le)(le)(le)（雖然(ran)沒(mei)有呈(cheng)現很廣(guang)的(de)(de)離散分(fen)布）。這(zhe)個(ge)時候應該停(ting)(ting)止消化，不要(yao)等到(dao)(dao)看到(dao)(dao)鏡下所有細(xi)胞(bao)(bao)(bao)都分(fen)離得非(fei)常好(hao)，間(jian)隙很大，才停(ting)(ting)止。細(xi)胞(bao)(bao)(bao)就是*成(cheng)(cheng)單個(ge)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)懸(xuan)液，之后在(zai)貼壁(bi)的(de)(de)過程中仍然(ran)會(hui)聚集，這(zhe)個(ge)是貼壁(bi)培養的(de)(de)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)，尤其是腫瘤細(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)(de)一(yi)個(ge)特性。如(ru)果和標準形態不一致(zhi)，那可能是(shi)自己沒消(xiao)化好(hao)導致(zhi)的，但如(ru)果消(xiao)化方法正(zheng)確，仍(reng)然(ran)成片(pian)分布(bu)(bu)，甚至*吹(chui)打(da)成單細胞懸液，貼壁后(hou)仍(reng)然(ran)成片(pian)分布(bu)(bu)，這是(shi)細胞的特(te)性，是(shi)因為(wei)貼壁過(guo)程(cheng)中重新聚集了(le)。這個時候你(ni)拼了(le)命(ming)要去讓它均勻分布(bu)(bu)，你(ni)的細胞之后(hou)會對(dui)你(ni)越來越不好(hao)。

3.EDTA的作(zuo)用。胰(yi)酶(mei)切(qie)割(ge)ECM的(de)一(yi)些負責粘(zhan)連(lian)和附著的(de)蛋白，而EDTA通(tong)過螯合(he)Ca離子，作用于Integrin的活性，所以EDTA的(de)作用更加溫和。有的(de)人(ren)在胰酶里添加一些EDTA，或(huo)者對付特別難消化(hua)的細胞(bao)，添(tian)加多一些EDTA。

4.PBS洗滌。消化(hua)之前(qian)用PBS洗(xi)滌，是常見(jian)的操作，因(yin)為血(xue)清中(zhong)含有抑制胰酶的蛋(dan)白。對于一些難消化細(xi)胞，那么可以配制不含Ca，Mg離子的PBS，因為這些離子(zi)也會(hui)抑(yi)制胰酶的(de)活性。但對于絕大(da)部分(fen)胰酶或者EDTA溶液潤(run)洗即(ji)可消化的細胞，不(bu)需要配制如(ru)此(ci)溶液。