科研同學養細胞，
都把細胞當成自己的娃，
娃生活地怎么樣，心情好不好，
快不快樂，是每天都要關注的事情。
因為擔心一不留神，
細胞娃就生存地不好，
甚至于受到污染，細胞 over 了！
如何讓細胞快樂，我們一起往下看！
 
1. 確保所有實驗室材料都無菌
交叉污染是細胞培養的大敵。即使是zui輕微的污染，也可能毀了幾個星期的成果。因培養箱內溫暖潮濕，真菌極易生長，因此必須注意定期清潔。此外，在將培養瓶、移液管及其他的相關物品放入超凈臺之前，應用酒精擦拭干凈，以避免污染。

2. 小心處理您的培養物
細胞培養的脆弱性怎么強調也不為過。劇烈搖晃，或連續的溫度波動可能會對生長產生不利的影響。確保培養箱是水平的，溫度均一，且遠離電動儀器。此外，盡量避免一次處理多個細胞系，因為它可能會影響細胞的基因型和表型。您還應定期完成 STR 圖譜分析，以確認細胞系的身份。

3. 在使用前正確解凍細胞
盡管解凍看起來是個簡單的步驟，但必須操作得當，以免傷害細胞。長時間暴露在高溫條件下會使細胞無法鋪板。因此，凍存管應當在 37°C 水浴中放置 2 分鐘，然后用條件培養基稀釋，以避免 DMSO 造成直接傷害。

4. 使用對數生長期的細胞
細(xi)胞培養過程共有(you) 3 個(ge)階段(duan)：停滯期(qi)、對數期(qi)和平臺(tai)期(qi)，分別代(dai)表(biao)了(le)低細(xi)胞生(sheng)長(chang)(chang)、高細(xi)胞生(sheng)長(chang)(chang)和無細(xi)胞生(sheng)長(chang)(chang)。zui有(you)活力的細(xi)胞是(shi)健康的，快速分裂的，在對數期(qi)以 70-80% 的匯合度(du)存在。

5. 在傳代之前不要讓細胞*匯合
匯合(he)度是指貼壁細(xi)胞(bao)占據(ju)培養瓶表面積的(de)比(bi)例。*匯合(he)意(yi)(yi)味著 100% 的(de)表面都(dou)被貼壁細(xi)胞(bao)覆蓋。一(yi)定要避免(mian)這種狀態，因為它意(yi)(yi)味著細(xi)胞(bao)不能繼續(xu)生長。不過，當務之急是使用活躍生長的(de)細(xi)胞(bao)。

6. 選擇*的培養基開發策略
在細胞培(pei)(pei)(pei)(pei)養過程中，培(pei)(pei)(pei)(pei)養基是控制產品質量、產量和成本的(de)zui重要(yao)因(yin)素。必須針對每種(zhong)培(pei)(pei)(pei)(pei)養物來定(ding)(ding)制培(pei)(pei)(pei)(pei)養基，以優化(hua)實驗(yan)結果。在決(jue)定(ding)(ding)以哪(na)種(zhong)方(fang)式來開(kai)發您的(de)培(pei)(pei)(pei)(pei)養基時，您有幾個(ge)選擇。您可以購買現成的(de)，自(zi)己開(kai)發，也可以與另(ling)一家公司(si)合作開(kai)發特定(ding)(ding)的(de)培(pei)(pei)(pei)(pei)養基。在這個(ge)過程中，您需(xu)要(yao)考慮時間和成本等因(yin)素。

7. 配制干粉培養基時評估水的質量
液體(ti)培(pei)養(yang)基往(wang)往(wang)會帶(dai)來(lai)比干粉(fen)培(pei)養(yang)基更(geng)高質(zhi)量(liang)的(de)結果。這(zhe)可能與水的(de)質(zhi)量(liang)有關。由于細菌(jun)在水中迅速生長，故需要監(jian)控內毒素及其他(ta)污染物。商業(ye)公(gong)司有資源(yuan)來(lai)監(jian)控和控制細菌(jun)生長，比如過濾器。因此使用商業(ye)化生產的(de)液體(ti)培(pei)養(yang)基會更(geng)加可靠一(yi)點(dian)。

8. 利用細胞的代謝特性來優化培養基
分(fen)(fen)析使用過的(de)(de)培(pei)養基，有助(zhu)于(yu)(yu)鑒(jian)定必要成分(fen)(fen)的(de)(de)代(dai)謝(xie)速(su)率(lv)，包括氨基酸(suan)和維(wei)生素。從(cong)細胞生長(chang)階段(duan)和蛋(dan)(dan)白生產階段(duan)收集到的(de)(de)動態代(dai)謝(xie)圖譜(pu)可用來平衡基礎培(pei)養基和添加培(pei)養基，指導(dao)培(pei)養基的(de)(de)重點(dian)，有助(zhu)于(yu)(yu)蛋(dan)(dan)白質(zhi)的(de)(de)生產。

9. 避免細胞的過度消化
胰(yi)蛋(dan)白酶(mei)(mei)通過消化負責(ze)讓細(xi)(xi)(xi)胞與容器結合的蛋(dan)白質，而實現貼壁細(xi)(xi)(xi)胞的傳代(dai)。如果(guo)細(xi)(xi)(xi)胞暴露(lu)在胰(yi)酶(mei)(mei)中時間太長(chang)，則胰(yi)酶(mei)(mei)將開始切割細(xi)(xi)(xi)胞表面蛋(dan)白，這會影響細(xi)(xi)(xi)胞行(xing)駛正常功(gong)能(neng)的能(neng)力(li)。

10. 培養基中不要一直使用抗生素
隨著(zhu)細胞培養物更加頻(pin)繁(fan)地暴(bao)露在抗生素(su)中，對抗生素(su)有著(zhu)天然耐藥性的菌(jun)株將開始出現。這種現象可(ke)掩蓋潛在的污染。