(一)冷凍管應如何解凍
取(qu)出(chu)冷(leng)凍管(guan)(guan)后,須立即放入 37 ℃ 水槽(cao)中(zhong)快速解凍,輕搖(yao)冷(leng)凍管(guan)(guan)使(shi)其在(zai) 1 分鐘內全部融化,并注意水面不可超過冷(leng)凍管(guan)(guan)蓋沿,否則(ze)易發生污染(ran)情形(xing)。另冷(leng)凍管(guan)(guan)由液氮桶(tong)中(zhong)取(qu)出(chu)解凍時,必(bi)須注意安全,預(yu)防冷(leng)凍管(guan)(guan)的(de)爆裂。
(二)細胞冷凍管解凍培養時,DMSO如何處理
在細胞(bao)(bao)解凍之后(hou),可(ke)直接離(li)心去(qu)除DMSO,用新(xin)(xin)鮮的(de)培養(yang)基懸浮后(hou)直接放入(ru)含有(you) 新(xin)(xin)鮮培養(yang)基的(de)培養(yang)角瓶中進行細胞(bao)(bao)培養(yang),如此可(ke)避免解凍后(hou)細胞(bao)(bao)生長(chang)受到DMSO影響。
(三)可否使用與原先培養條件不同的培養基
每一細(xi)胞株均有其特定使用且已(yi)適(shi)應的細(xi)胞培(pei)養基,若(ruo)驟然使用和原先提供(gong)培(pei)養條件不同的培(pei)養基,細(xi)胞大都無法立即適(shi)應,造成細(xi)胞無法存活,不應該馬(ma)上替(ti)換(huan)。
(四)可否使用與原先培養條件不同的血清種類
血(xue)(xue)清是細(xi)胞培養上一(yi)個極為重要的(de)營(ying)養來源,所(suo)以血(xue)(xue)清的(de)種(zhong)類和品質對于細(xi)胞的(de)生(sheng)長會產(chan)生(sheng)極大(da)的(de)影響。來自(zi)不(bu)同物種(zhong)的(de)血(xue)(xue)清,在一(yi)些(xie)物質或分(fen)子的(de)量或內容物上都有所(suo)不(bu)同,血(xue)(xue)清使(shi)用錯誤常會造(zao)成細(xi)胞無法存活。
(五)何謂 FBS,FCS,CS,HS
FBS (fetal bovine serum) 和(he) FCS (fetal calf serum) 是(shi)相同的意(yi)思,兩者都是(shi)指胎牛血(xue)清(qing)。CS (calf serum) 則是(shi)指小牛血(xue)清(qing)。HS (horseserum) 則是(shi)指馬血(xue)清(qing)。
(六)培養細胞時應使用 5% 或 10% CO2
一般培養基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作為 pH 的緩沖系統,而培養基中 NaHCO3 的含量將決定細胞培養時應使用的 CO2 濃度。理論當培養基中 NaHCO3 含量為每公升 3.7 g 時,細胞培養時應使用 10% CO2;當培養基中 NaHCO3 為每公升 1.5 g 時,則應使用 5% CO2 培養細胞(bao)。
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