（一）何時須更換培養基。培養基中是否須添加抗生素。

視細胞生長密度而定，或(huo)遵照(zhao)細胞株基本數(shu)據上的更換(huan)時間，按(an)時更換(huan)培養(yang)基即可。

一(yi)般正常培養狀態下(xia)，培養基中可以(yi)添加抗生素(su)。 按1％體積(ji)分(fen)數加入雙抗貯(zhu)存液(青(qing)霉素(su)+鏈(lian)霉素(su))，使青(qing)霉素(su)和鏈(lian)霉素(su)的(de)終濃度分(fen)別為100 U／mL和100 μ／mL。

(二）貼壁細胞傳代時所使用的 trypsin-EDTA 濃度及相應處理

一般使用(yong)的 trypsin-EDTA 濃度為(wei) 0.25% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。*次(ci)開(kai)瓶后(hou)應立即少量分裝于(yu)無菌試管中，保(bao)存于(yu) –20 ℃，避免反(fan)復冷凍(dong)解凍(dong)造成 trypsin 的活(huo)性降低，并可減(jian)少污染的機會.。

（三）將一般動物細胞離心下來，離心速率多少

回(hui)收動物細胞，其離心速(su)率一(yi)般為 1 000 rpm，5~10 分鐘，過高的(de)轉速(su)，將造成細胞死亡。

（四）細胞的接種密度

依照細胞(bao)株基本數據上的接種(zhong)密度或稀釋分盤的比例接種(zhong)即可(ke)。細胞(bao)數太少或稀釋的太多亦是(shi)造成細胞(bao)無法生長的重要(yao)原因(yin)之一。

（五）細胞冷凍培養基的成分及DMSO的等級

動物細(xi)胞冷(leng)凍保存時zui常(chang)使用的冷(leng)凍培(pei)養(yang)基是(shi)含 5~10% DMSO （dimethyl sulfoxide） 和(he) 90~95 % 原來細(xi)胞生長用的新鮮培(pei)養(yang)基均(jun)勻混合。注意：由于(yu) DMSO 稀釋時會(hui)放出大量熱能，故不可將 DMSO 直接加(jia)入(ru)細(xi)胞液中，必須(xu)使用前先行配制完成。冷(leng)凍保存使用的 DMSO 等級(ji)，必須(xu)為 Tissue culture grade 的 DMSO ，其本身即為無菌狀況，*次開瓶后應(ying)立即少量分裝(zhuang)于(yu)無菌試管中避光(guang)保存。

（六）冷凍保存細胞的方法及冷凍細胞濃度

將貼壁細胞消化后離心收集，懸浮細胞直接離心收集，以含有DMSO*培養基或胎牛血清的凍存液重懸細胞至終濃度約1x10⁶/ml。。以(yi)每(mei)管1～2ml分裝至凍存(cun)管中。用絕(jue)熱材料包裹置-70攝氏度冰箱冷(leng)凍。次日保(bao)存(cun)到液氮中。 

冷凍管內細胞數目一般為 1x10⁶ cells/ml vial，融合瘤細胞則以 5x10⁶ cells/ml vial 為宜。