通過(guo)選(xuan)擇法或(huo)克隆(long)形(xing)成法從原代培養細(xi)胞中(zhong)獲(huo)得(de)具有特殊性質(zhi)或(huo)標志物的細(xi)胞稱為(wei)細(xi)胞株(zhu)。穩定(ding)細(xi)胞株(zhu)篩(shai)(shai)選(xuan)一般(ban)是將外源DNA克隆(long)到(dao)具有某種抗性或(huo)選(xuan)擇基因的載體上，載體被轉(zhuan)染到(dao)宿主細(xi)胞并整(zheng)合到(dao)染色體中(zhong)，用載體中(zhong)所含(han)的選(xuan)擇標志進行篩(shai)(shai)選(xuan)，篩(shai)(shai)選(xuan)得(de)到(dao)可穩定(ding)表達目的蛋白的細(xi)胞株(zhu)。西生(sheng)物醫(yi)藥提供穩定(ding)細(xi)胞株(zhu)篩(shai)(shai)選(xuan)服務。 肝細(xi)胞(bao)(bao)(bao)癌(ai)(HCC)是一種最(zui)常見(jian)的(de)(de)(de)腫瘤，也(ye)是全球引發癌(ai)癥(zheng)患者死亡的(de)(de)(de)第3大原因。肝癌(ai)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)株是通(tong)過(guo)克隆培(pei)養法或通(tong)過(guo)篩選(xuan)培(pei)養法從肝癌(ai)病理(li)組織(zhi)中分(fen)離(li)(li)出(chu)單細(xi)胞(bao)(bao)(bao)后(hou)，由單個細(xi)胞(bao)(bao)(bao)不斷分(fen)裂增(zeng)殖形(xing)成的(de)(de)(de)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)群，具(ju)有與原代組織(zhi)極為(wei)相似的(de)(de)(de)特性和人體完整的(de)(de)(de)遺傳基因，并能穩定(ding)傳代。人肝癌(ai)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)株因其分(fen)離(li)(li)來源的(de)(de)(de)親本患者不同故名(ming)(ming)稱各異，所以根據(ju)它(ta)的(de)(de)(de)來源不同而命名(ming)(ming)的(de)(de)(de)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)株稱為(wei)人肝癌(ai)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)系。
下面(mian)來對國內較為常用的(de)幾株人肝(gan)癌細胞(bao)系的(de)特性(xing)、優勢及其在實驗(yan)中(zhong)的(de)應用進行整理(li)，為腫(zhong)瘤學者實驗(yan)研究提(ti)供參考(kao)。
1、 SMMC-7721人肝癌細(xi)胞株
SMMC-7721細(xi)胞系(xi)是于(yu)1977年建(jian)立，材料(liao)取(qu)自一(yi)名50歲男性(xing)原發性(xing)肝細(xi)胞癌HCC患者的(de)(de)手(shou)(shou)術切(qie)除標本進行(xing)體外(wai)培養(yang)而得。其生物學特(te)性(xing)如下: 細(xi)胞系(xi)生長較(jiao)迅速穩定(ding)，在原代細(xi)胞開始傳代階段(duan)增殖緩慢，以后趨于(yu)穩定(ding)而迅速生長；細(xi)胞形(xing)態(tai)為上(shang)皮樣；貼壁生長；細(xi)胞的(de)(de)亞(ya)微結構形(xing)態(tai)符合癌細(xi)胞的(de)(de)一(yi)般(ban)特(te)征(zheng)；甲胎蛋白(bai)(α-fetoprotein, AFP)免(mian)疫熒光(guang)染色呈陽性(xing)；LDH同(tong)工(gong)酶譜的(de)(de)變化與肝癌細(xi)胞的(de)(de)一(yi)般(ban)特(te)征(zheng)一(yi)致；免(mian)疫缺陷小鼠體內可(ke)成瘤率高，動物異種后瘤結節(jie)經(jing)病理切(qie)片(pian)檢查，其組織形(xing)態(tai)和原手(shou)(shou)術切(qie)除標本類(lei)似。
2、Bel-7402人肝(gan)癌細胞株(zhu)
Bel-7402于(yu)(yu)1974年建立，來源于(yu)(yu)一位53歲男(nan)性(xing)肝(gan)癌患者的(de)手術切(qie)除標本(ben)，屬于(yu)(yu)HCC。生物(wu)學(xue)特(te)性(xing)如下: 細(xi)胞(bao)(bao)增(zeng)長(chang)迅速而恒定，6-7 d可(ke)傳代1次(ci)；細(xi)胞(bao)(bao)形(xing)態以多邊形(xing)上(shang)皮(pi)樣占(zhan)絕大(da)多數；貼壁生長(chang)；細(xi)胞(bao)(bao)染(ran)色(se)體中有(you)一大(da)而長(chang)的(de)近端著絲點染(ran)色(se)體，出現頻(pin)率高(gao)，是本(ben)株細(xi)胞(bao)(bao)的(de)標記染(ran)色(se)體；AFP免疫熒光(guang)反應(ying)陽(yang)性(xing)；LDH、G6PD、TAT等酶代謝及細(xi)胞(bao)(bao)的(de)超微(wei)結(jie)構基(ji)本(ben)上(shang)保(bao)持臨床(chuang)(chuang)人(ren)體肝(gan)癌的(de)特(te)性(xing)；異(yi)種接種后成瘤(liu)率高(gao)，3-4 d可(ke)成瘤(liu)，瘤(liu)塊(kuai)組織學(xue)病理(li)與臨床(chuang)(chuang)HCC相近。
3、 MHCC97人肝癌細胞(bao)株
該(gai)細(xi)胞系由上海醫(yi)科大學中山醫(yi)院建立, 將(jiang)一(yi)名我國39歲男性HCC患者的(de)(de)肝右葉(xie)轉移病灶(zao)的(de)(de)手術切(qie)除(chu)標本(ben)接種(zhong)于裸(luo)鼠肝內建造出人肝癌裸(luo)鼠轉移模(mo)型(xing)(LCI-D20)而得。已證實, 經過再次分(fen)離(li)得到(dao)的(de)(de)MHCC97H、MHCC97L及HCCLM3 3種(zhong)細(xi)胞株，依(yi)據(ju)它們的(de)(de)轉移特(te)點，雖來源同(tong)一(yi)父(fu)系，但(dan)具(ju)有異質性，即具(ju)有不同(tong)的(de)(de)轉移潛能。
MHCC97人(ren)肝癌細(xi)(xi)胞(bao)系(xi)于(yu)1998年從裸鼠人(ren)肝癌轉(zhuan)移模(mo)型(LCI-D20)體外傳代(dai)培(pei)養獲得，該細(xi)(xi)胞(bao)系(xi)符合一般(ban)人(ren)惡性(xing)(xing)腫瘤的(de)病(bing)理學和遺(yi)傳學特(te)征，細(xi)(xi)胞(bao)呈上皮樣，貼壁生長，血清HBsAg、AFP高(gao)表達(da)，成瘤率高(gao)且優先轉(zhuan)移的(de)靶器(qi)官是肺，肺轉(zhuan)移率100%，故證實該細(xi)(xi)胞(bao)系(xi)為高(gao)轉(zhuan)移特(te)性(xing)(xing)的(de)人(ren)肝癌細(xi)(xi)胞(bao)系(xi)。
2001年，研究者從(cong)MHCC97細(xi)(xi)胞系(xi)中(zhong)發現并(bing)分離出不同轉(zhuan)移(yi)潛能的2個細(xi)(xi)胞系(xi)MHCC97-H和MHCC97-L，前(qian)者肺(fei)轉(zhuan)移(yi)率100%，后(hou)者40%；從(cong)生(sheng)長速(su)度上，前(qian)者細(xi)(xi)胞倍增時間較后(hou)者短(duan)；穿透人(ren)工基底膜能力(li)前(qian)者較后(hou)者大； 前(qian)者均(jun)較后(hou)者活力(li)強、代謝旺(wang)。傳代至20代后(hou)，兩種形(xing)態學特(te)征及生(sheng)長速(su)度方面均(jun)較穩定(ding)。之后(hou)又從(cong)MHCC97-H裸鼠接(jie)種后(hou)成功得到(dao)更高轉(zhuan)移(yi)潛能的HCCLM3細(xi)(xi)胞系(xi)。
4、HepG2人(ren)肝(gan)母(mu)細胞瘤
1979年(nian)，從阿根廷一名15歲(sui)高加(jia)索男孩的(de)原發性(xing)肝(gan)胚細(xi)(xi)胞(bao)(bao)瘤(liu)中(zhong)分離出(chu)并建立, 該細(xi)(xi)胞(bao)(bao)系(xi)呈上皮(pi)樣(yang); 貼壁抱團生長; 生長較快, 傳(chuan)代(dai)周期為(wei)1-2d; 低轉(zhuan)移(yi); 裸鼠(shu)中(zhong)成瘤(liu)率較差; AFP陽性(xing); HBsAg陰性(xing), 然(ran)而(er)目前(qian)尚(shang)未證明該細(xi)(xi)胞(bao)(bao)中(zhong)有(you)乙型肝(gan)炎病毒(hepatitis B virus, HBV)基(ji)因組; 但通過實(shi)驗(yan)已(yi)證實(shi), 該細(xi)(xi)胞(bao)(bao)系(xi)分化程(cheng)度較高, 細(xi)(xi)胞(bao)(bao)里(li)代(dai)謝酶的(de)生物(wu)(wu)轉(zhuan)化特性(xing)較完整, 不需加(jia)入外(wai)源(yuan)性(xing)活化系(xi)統。在藥(yao)物(wu)(wu)作用(yong)相關研究中(zhong)代(dai)謝酶保持(chi)穩(wen)定, 不會因傳(chuan)代(dai)次數增多而(er)有(you)所改(gai)變, 所含(han)有(you)的(de)生物(wu)(wu)轉(zhuan)化代(dai)謝酶與人正(zheng)常(chang)(chang)肝(gan)實(shi)質細(xi)(xi)胞(bao)(bao)同源(yuan), 因此, 常(chang)(chang)被用(yong)于體(ti)外(wai)肝(gan)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)代(dai)謝或遺傳(chuan)毒性(xing)試驗(yan)方面的(de)理想(xiang)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)系(xi). 其中(zhong), HepG2.2.15是目前(qian)應用(yong)較為(wei)廣泛的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)株, 它是HepG2的(de)衍生物(wu)(wu)是體(ti)外(wai)篩選抗HBV藥(yao)物(wu)(wu)的(de)良好模型, 并用(yong)于抗HBV新藥(yao)開發的(de)體(ti)外(wai)研究工具。
5、Hep3B人肝(gan)癌細胞株
Hep3B分離自8歲美(mei)國(guo)黑人男(nan)童的(de)肝癌(ai)組(zu)織(zhi). 細胞形(xing)態(tai)跟HepG2類似(si), 呈上皮細胞, 電鏡下(xia)觀察胞漿里面很多(duo)粗(cu)大的(de)黑顆粒, 同樣喜(xi)抱團貼壁生長; 其在(zai)裸鼠(shu)中能(neng)致瘤(liu), 但基本不(bu)轉移. HBV陽性, 這與HepG2不(bu)同, 這株(zhu)細胞整(zheng)合了完整(zheng)的(de)HBV基因組(zu)，可用于(yu)HBV感染(ran)后發展致癌(ai)相關研究。
6、 Huh-7人肝癌細胞株
該細(xi)(xi)(xi)胞(bao)系(xi)于(yu)1982年從一名患有肝癌的(de)57歲(sui)日本(ben)男性(xing)肝癌組織標本(ben)上培養(yang)而(er)得。該細(xi)(xi)(xi)胞(bao)AFP陽性(xing)，高度(du)分化, 細(xi)(xi)(xi)胞(bao)呈上皮樣, 貼(tie)壁生(sheng)長. 特(te)點是(shi)HBV陰性(xing), 而(er)具有丙型肝炎病(bing)毒(hepatitis C virus, HCV)易感性(xing)，故可用于(yu)HCV與肝癌的(de)關系(xi)的(de)研(yan)究. 除了(le)用于(yu)研(yan)究致癌性(xing), 還用于(yu)基(ji)因表達的(de)調節機制(zhi)(zhi)、新(xin)陳代謝(xie)及VLDL的(de)分泌等. 此(ci)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)系(xi)的(de)特(te)別之處(chu)如下: 可用于(yu)生(sheng)產重組蛋白(bai)如促紅細(xi)(xi)(xi)胞(bao)生(sheng)成素; 在蛋白(bai)質(zhi)生(sheng)物學方面(mian)用于(yu)研(yan)究在肝細(xi)(xi)(xi)胞(bao)內(nei)復制(zhi)(zhi)的(de)登革病(bing)毒; 廣(guang)泛用于(yu)異種移植(zhi)動物模型.
7、 PLC/PRF/5人肝癌(ai)亞歷山大細(xi)胞
PLC/PRF/5人(ren)肝(gan)癌亞歷山大細胞于(yu)1976年建(jian)系, 細胞來(lai)(lai)自一位患有原發性(xing)(xing)HCC的(de)(de)莫桑比克男性(xing)(xing)患者(zhe)的(de)(de)標本; 為上皮樣貼壁生(sheng)(sheng)長; AFP陽(yang)性(xing)(xing), 不產(chan)生(sheng)(sheng)白蛋(dan)白; 分泌ad亞型的(de)(de)HBsAg而不產(chan)生(sheng)(sheng)HBcAg或(huo)HBeAg和(he)Dane顆粒, 卻可(ke)(ke)(ke)(ke)維持HAV的(de)(de)繁殖; 該(gai)細胞可(ke)(ke)(ke)(ke)能(neng)含有全部HBV基因(yin)組, 同工(gong)酶(mei)譜及(ji)核(he)型與人(ren)類(lei)同源; 裸鼠異(yi)種移植可(ke)(ke)(ke)(ke)致(zhi)瘤. 此細胞系因(yin)其產(chan)生(sheng)(sheng)HBsAg的(de)(de)物理化學和(he)免(mian)疫化學特性(xing)(xing)跟(gen)HBV攜帶者(zhe)血(xue)清中HBsAg相似, 因(yin)此, 可(ke)(ke)(ke)(ke)被用來(lai)(lai)研究HBV體外病毒(du)及(ji)其與原發性(xing)(xing)肝(gan)癌的(de)(de)關聯, 抗(kang)HBV疫苗所需的(de)(de)HBsAg顆粒的(de)(de)制備及(ji)抗(kang)病毒(du)藥物的(de)(de)制備等方面。
人肝癌細胞系具有以下優點(dian)：
首先(xian)，在選擇實驗(yan)對(dui)象的比(bi)較上，人肝(gan)癌(ai)(ai)(ai)細(xi)胞(bao)系相較于人原代(dai)肝(gan)細(xi)胞(bao)，克(ke)服了人原代(dai)肝(gan)細(xi)胞(bao)來源困難(nan)、實驗(yan)難(nan)控制、存活(huo)時間(jian)短的局限，肝(gan)癌(ai)(ai)(ai)細(xi)胞(bao)系為已獲得的穩定傳(chuan)代(dai)的細(xi)胞(bao)，具(ju)有來源方便、操作簡單(dan)、條件可(ke)控和可(ke)重復等優(you)點，是用于肝(gan)癌(ai)(ai)(ai)疾病(bing)相關研究的理想對(dui)象。
其(qi)次(ci)，肝癌(ai)細胞(bao)系均(jun)選擇來源于確(que)診肝癌(ai)患者的(de)(de)病理組織，具有與(yu)肝癌(ai)患者體(ti)內相似的(de)(de)遺(yi)傳基因組，其(qi)發生發展機(ji)制(zhi)、功能(neng)蛋白表達(da)、病毒復制(zhi)能(neng)力、侵(qin)襲轉移功能(neng)及抗藥性等，具有與(yu)人類親源體(ti)極其(qi)相近(jin)的(de)(de)特點，因此更(geng)適合應(ying)用于肝癌(ai)各領域(yu)的(de)(de)研(yan)究.
