培養(yang)基(ji)是(shi)細胞培養(yang)中(zhong)*的營養(yang)成(cheng)分(fen)，但是(shi)基(ji)礎的培養(yang)基(ji)卻給實驗者帶來了一系列的問題。

別小看細(xi)胞培養，這里可(ke)蘊含著(zhu)大學問。

1.怎樣查到(dao)一個(ge)特定細(xi)胞株的相關知識和(he)培養(yang)條件？

ATCC（American Type Culture Collection）收集了絕(jue)大多數細(xi)(xi)胞(bao)的詳(xiang)細(xi)(xi)資料。打開ATCC網頁的Cells and hybridomas鏈(lian)接(jie)，輸(shu)入(ru)細(xi)(xi)胞(bao)名稱就可以(yi)搜索ATCC的細(xi)(xi)胞(bao)數據(ju)庫。數據(ju)庫中有(you)每一種細(xi)(xi)胞(bao)的詳(xiang)細(xi)(xi)描(miao)述，包括細(xi)(xi)胞(bao)的來源，培(pei)養(yang)和凍存條件，以(yi)及相關文獻(xian)等(deng)資料。

2.如何(he)選用特殊細胞系培養基？

培養某類型細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)沒(mei)有(you)固定的培養條(tiao)件。MEM中培養的細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，很可(ke)能在DMEM或M199中同樣容易生(sheng)長。總之，首-選MEM、DMEM做貼(tie)壁細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培養；RPMI1640做懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培養；

新的細胞培養時要詳查資料。

3.自己新配(pei)制的液體培養基能保存(cun)多久？

我們建議將(jiang)新(xin)配制的培(pei)(pei)養基(ji)(ji)放置于4℃，避光保存盡量在(zai)一周內使用完畢，培(pei)(pei)養基(ji)(ji)越新(xin)鮮越好(hao)。

4.培養(yang)基中添加了血(xue)清和抗生素后，可長期(qi)保存嗎？

一旦(dan)您在新(xin)鮮培養基中添加了血(xue)清(qing)和(he)抗生素(su)(su)時，您應該在一到兩周內使用它。因為一些抗生素(su)(su)和(he)血(xue)清(qing)中的基本(ben)成(cheng)分在解(jie)凍后就開始(shi)降解(jie)。

5.培(pei)養基(ji)中是否須添加抗生素？

除了特殊篩選系統外，一般正常培養狀(zhuang)態(tai)下(xia)，培養基中不(bu)應添加任(ren)何抗生(sheng)素。

為防止細菌、真(zhen)菌污染，可以加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液，其(qi)培(pei)養基中的(de)終濃度為青霉素100U/ml，鏈霉素為100ug/ml，但是不建議長期使用。

6.液體培養基可(ke)以(yi)放-20℃保存嗎？

不可(ke)以！因(yin)為(wei)在(zai)-20℃下，培(pei)養(yang)基中的(de)鹽(yan)容(rong)易析出，培(pei)養(yang)基融化(hua)后，有的(de)鹽(yan)可(ke)能無法重新溶解，從而(er)導致培(pei)養(yang)基滲(shen)透(tou)壓降低，培(pei)養(yang)細(xi)胞時(shi)，細(xi)胞容(rong)易破裂(lie)而(er)死(si)亡。

7.為何(he)培養基保存于4℃冰箱中，顏色會偏暗(an)紅色，且pH值越來越偏堿性？

培養基(ji)保(bao)存于4℃冰箱(xiang)中， 培養基(ji)內之CO2 會(hui)逐(zhu)漸溢出，造成培養基(ji)越來越偏(pian)堿性。而培養基(ji)中的酸堿指示劑(ji)(通常為phenol red) 的顏色也會(hui)隨堿性增加(jia)而更偏(pian)暗紅。培養基(ji)偏(pian)堿之結(jie)果， 將造成細胞生長停滯或死亡。若培養基(ji)偏(pian)堿時， 可以通入無菌過(guo)濾的CO2， 以調整pH 值。

8.為什么(me)液體培(pei)養基1640顏色發黃(huang)，是pH值不對(dui)嗎？

不是。因(yin)為(wei)配方原因(yin)，1640為(wei)減酚紅(hong)型，其(qi)中(zhong)酚紅(hong)的濃度(du)只有DMEM的四分之一，所以是因(yin)為(wei)酚紅(hong)濃度(du)低(di)，而非PH值低(di)。

9.培養液pH是怎樣影響細胞(bao)生長的？

由于大多數細(xi)胞適(shi)宜(yi)PH值為7.2-7.4，偏(pian)離此范(fan)圍(wei)對細(xi)胞將(jiang)產生有害的(de)影響。各種細(xi)胞對PH值要求也不*相(xiang)同(tong)，原代細(xi)胞培養一般對PH值變動耐(nai)受差(cha)，無限(xian)細(xi)胞系耐(nai)受力強。

但總(zong)體(ti)來(lai)說，細胞(bao)耐酸(suan)性(xing)比耐堿性(xing)強一些，偏酸(suan)環(huan)境(jing)中更有利于細胞(bao)的(de)(de)生長。因此(ci)，配制培養(yang)用(yong)液(ye)(ye)時(shi)可把液(ye)(ye)體(ti)的(de)(de)PH值稍微(wei)調的(de)(de)偏酸(suan)一些。液(ye)(ye)體(ti)在經(jing)過(guo)0.1um或0.2um濾(lv)膜過(guo)濾(lv)時(shi)，PH值會(hui)向上浮(fu)動0.2左右。

10.培(pei)養液(ye)滲透壓(ya)是怎樣影響(xiang)細胞生長的？

當細(xi)胞(bao)內、外環(huan)境的分(fen)子濃度不同時就會產(chan)生滲(shen)透壓。這種情況下，水(shui)分(fen)通過(guo)滲(shen)透流入或(huo)流出細(xi)胞(bao)，從(cong)而改變細(xi)胞(bao)的內環(huan)境。

高滲透壓迫使水分從細胞(bao)中擴散出來導致細胞(bao)收縮，這種情況會使DNA和蛋白(bai)遭到破壞，細胞(bao)周期停滯以及終使細胞(bao)死亡(wang)；反之，低滲透壓使水分流入細胞(bao)內，使細胞(bao)腫脹破裂。

11.為什(shen)么有客戶要求培(pei)養基中不含酚(fen)紅？

研究表明，酚(fen)(fen)紅(hong)可以(yi)模(mo)擬(ni)固醇類(lei)激素的作用(yong)(yong)（特別(bie)是雌激素）。為(wei)避免固醇類(lei)反應，細胞培(pei)養，尤(you)其是哺(bu)乳類(lei)細胞時，用(yong)(yong)不加酚(fen)(fen)紅(hong)的培(pei)養基(ji)。由于酚(fen)(fen)紅(hong)干擾檢測，一些研究人(ren)員在(zai)做流式細胞檢測時，不使用(yong)(yong)加酚(fen)(fen)紅(hong)的培(pei)養基(ji)。

12.酚紅的(de)作(zuo)用是什(shen)么？

酚(fen)紅在培養(yang)基(ji)中被(bei)用來作為(wei)PH值指示劑：中性時為(wei)紅色(se)(se)，酸(suan)性時為(wei)黃色(se)(se)，堿性時為(wei)紫色(se)(se)。

13.干粉培養基里(li)含NaHCO3嗎？

所有的干粉培養基中都不(bu)含NaHCO3 。

請依(yi)據說(shuo)明(ming)書或包裝袋上的標注(zhu)，在干粉(fen)培養基*溶解后添加NaHCO3 。

14.NaHCO3的作用是什么？

與CO2一起形成緩(huan)沖系統，保持培養基(ji)PH值穩(wen)定(ding)。

15.我們實驗室培養箱CO2濃度一直(zhi)以來(lai)都(dou)是5%，這樣(yang)可以嗎？

當(dang)然不可以，不同的(de)培養基(ji)要(yao)求(qiu)(qiu)添加NaHCO3的(de)量(liang)不一(yi)樣，如DMEM要(yao)求(qiu)(qiu)添加3.7g/L，為了保持(chi)PH值穩定，必須用高濃度(du)的(de)CO2平衡，一(yi)般(ban)不低于(yu)8%，而1640等要(yao)求(qiu)(qiu)添加NaHCO3 2.2g/L，還有些培養基(ji)要(yao)求(qiu)(qiu)添加更少，那么(me)這些培養基(ji)就(jiu)要(yao)求(qiu)(qiu)較低的(de)濃度(du)平衡，一(yi)般(ban)是5%。

16.培養基(ji)中丙-酮(tong)酸鈉的作用是(shi)什(shen)么(me)？

丙(bing)-酮酸鈉可以作為細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)中的(de)替代碳源，盡管細(xi)胞(bao)更(geng)傾向于(yu)以葡(pu)萄(tao)糖作為碳源，但是如果(guo)沒(mei)有(you)葡(pu)萄(tao)糖的(de)話，細(xi)胞(bao)也可以代謝丙(bing)-酮酸鈉。

丙-酮酸鈉的(de)貯存(cun)液濃(nong)(nong)度一般(ban)為(wei)50mM，-20℃保存(cun)，培養基中的(de)終濃(nong)(nong)度為(wei)1mM.

17.谷氨酰(xian)胺的作用是什么(me)？

幾乎所有的(de)(de)(de)(de)細胞對谷氨(an)酰胺都有較(jiao)高的(de)(de)(de)(de)要求(qiu)。谷氨(an)酰胺脫掉氨(an)基后，可作為培養細胞的(de)(de)(de)(de)能量(liang)(liang)來源，參(can)與蛋(dan)白(bai)質的(de)(de)(de)(de)合成和(he)能量(liang)(liang)代(dai)謝。在缺(que)少谷氨(an)酰胺時，細胞生長不(bu)良(liang)而死亡(wang)。所以，各種培養液中都含有較(jiao)大量(liang)(liang)的(de)(de)(de)(de)谷氨(an)酰胺。

谷氨(an)酰(xian)胺(an)(an)在溶液中很不穩定，應(ying)置-20℃冰凍保存(cun)(cun)，用前加入(ru)培養基中。加有谷氨(an)酰(xian)胺(an)(an)的液體培養基4度(du)冰箱(xiang)儲存(cun)(cun)兩周(zhou)以上時，應(ying)重新加入(ru)原來量的谷氨(an)酰(xian)胺(an)(an)。

18.在(zai)培養基中(zhong)加入HEPES有何(he)好處？

培(pei)養基(ji)中-常(chang)用的Buffer system是碳酸氫鹽，它可提供(gong)營(ying)養，但(dan)卻在(zai)生理(li)PH值條(tiao)件下(xia)會降低緩沖(chong)能力。而HEPES是一種(zhong)很強的Buffer，加(jia)入HEPES能使細胞培(pei)養基(ji)在(zai)PH7.2-7.6條(tiao)件下(xia)緩沖(chong)能力增強。

Hepes的貯存液濃(nong)度一般(ban)為1M，常溫保存。培(pei)養基(ji)中的終濃(nong)度為25mM，即5ml 1M的Hepes加入到200ml*培(pei)養基(ji)中。

19.GlutaMAX-Ⅰ是(shi)什么？培養(yang)細胞如何利(li)用(yong)GlutaMAX-Ⅰ？這個二肽(tai)有多穩定(ding)？

GlutaMAX-Ⅰ是一個L-谷(gu)氨酰(xian)胺的衍生物，其不穩定的a-氨基用L-丙氨酸來保護(hu)。一種(zhong)肽(tai)酶逐漸裂解二肽(tai)，釋放L-谷(gu)氨酰(xian)胺供利(li)用。

GlutaMAX-Ⅰ二肽非常穩定，即使在121℃滅(mie)菌20min， GlutaMAX-Ⅰ二肽溶液有小的(de)降(jiang)解(jie)；而在相同條件下(xia)，L-谷氨酰胺幾乎*降(jiang)解(jie)。

L-谷氨(an)酰胺在(zai)細(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養(yang)時是重要的，但(dan)其在(zai)溶(rong)液中(zhong)不穩定，經過一(yi)(yi)段時間后會降(jiang)解(jie)，確切的降(jiang)解(jie)率一(yi)(yi)直沒有終確定。L-谷氨(an)酰胺的降(jiang)解(jie)導致氨(an)的形成，而氨(an)對于一(yi)(yi)些細(xi)胞(bao)具有毒性。因此(ci)GlutaMAX-Ⅰ是細(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養(yang)中(zhong)谷氨(an)酰胺的替(ti)代品。

20.可(ke)否使用與原先培(pei)養(yang)條件不同的培(pei)養(yang)基(ji)？

不能。每(mei)一細(xi)胞株均有其特定使用(yong)且已(yi)適應之細(xi)胞培(pei)養(yang)基(ji)，若驟然使用(yong)和原先提供之培(pei)養(yang)條件不同的(de)培(pei)養(yang)基(ji)，細(xi)胞大多無法立即(ji)適應，造成(cheng)細(xi)胞無法存活。