科研同學養細胞，

都把(ba)細胞當成自(zi)己的娃，

娃(wa)生(sheng)活地怎么樣，心情好不好，

快不快樂(le)，是(shi)每天(tian)都要關(guan)注的(de)事(shi)情(qing)。

因為擔心一不留神，

細胞娃就(jiu)生存地不好，

甚至于(yu)受到污染(ran)，細胞(bao)over了！

如何讓細胞快樂，我們(men)一起往下看！

1.確保所有實驗室材料都無菌

交叉污染是細胞培養(yang)的(de)大敵(di)。即使是zui輕微的(de)污染，也可能毀了幾個星期(qi)的(de)成果。因(yin)培養(yang)箱內溫暖(nuan)潮濕(shi)，真(zhen)菌極(ji)易生長，因(yin)此(ci)必(bi)須注意定期(qi)清潔。此(ci)外(wai)，在將(jiang)培養(yang)瓶、移液管(guan)及其他的(de)相關物品放入超凈臺(tai)之前(qian)，應用(yong)酒精擦拭干凈，以(yi)避(bi)免污染。

2.小心處理您的培養物

細胞培養的脆弱性怎么強調也不為過。劇烈搖晃，或連續的溫度波動可能會對生長產生不利的影響。確保培養箱是水平的(de)，溫度均一，且遠離電動儀器。此外(wai)，盡量避免一次(ci)處理多個細胞系(xi)，因(yin)為它(ta)可能會影響細胞的(de)基因(yin)型和表型。您還應(ying)定期完成STR圖譜分析，以確認細胞系(xi)的(de)身(shen)份。

3.在使用前正確解凍細胞

盡管解凍看起來是個簡單的步驟，但必須操作得當，以免傷害細胞。長時間暴露在高溫條件下會使細胞無法鋪板。因此，凍存管應當在(zai)37°C水浴中放(fang)置2分鐘，然后用條件培養基稀釋，以避免DMSO造成直接傷害。

4.使用對數生長期的細胞

細胞培養過程共有3個階段：停滯期、對數期和平臺期，分別代表了低細胞生長、高細胞生長和無細胞生長。zui有活力的細胞是健康的，快速分lie的，在對數期以70-80%的(de)匯(hui)合度存在。

5.在傳代之前不要讓細胞*匯合

匯合(he)度是(shi)指貼(tie)壁(bi)細胞占據培養瓶表面(mian)積的(de)比(bi)例。*匯合(he)意味著100%的(de)表面(mian)都被貼(tie)壁(bi)細胞覆(fu)蓋。一(yi)定要避免這種狀態，因為(wei)它意味著細胞不(bu)(bu)能(neng)繼(ji)續生長。不(bu)(bu)過，當務之急是(shi)使用活躍生長的(de)細胞。

6.選擇*的培養基開發策略

在細胞(bao)培養(yang)過程(cheng)中，培養(yang)基是控制產(chan)品質量(liang)、產(chan)量(liang)和(he)(he)成本的(de)zui重(zhong)要因素。必須(xu)針(zhen)對每種培養(yang)物來定制培養(yang)基，以優化實驗結果。在決(jue)定以哪種方式來開發您的(de)培養(yang)基時(shi)，您有幾個選(xuan)擇。您可以購買(mai)現成的(de)，自己(ji)開發，也可以與另(ling)一(yi)家(jia)公司合作(zuo)開發特定的(de)培養(yang)基。在這個過程(cheng)中，您需要考慮時(shi)間和(he)(he)成本等(deng)因素。

7.配制干粉培養基時評估水的質量

液體培(pei)養基(ji)往(wang)往(wang)會帶來(lai)比(bi)干粉培(pei)養基(ji)更高質量(liang)的(de)結果。這可(ke)能與水(shui)的(de)質量(liang)有關。由于細(xi)菌在(zai)水(shui)中迅速生長(chang)，故需要監(jian)控內毒素及其(qi)他污染物(wu)。商業公司有資源(yuan)來(lai)監(jian)控和控制細(xi)菌生長(chang)，比(bi)如過濾器。因此(ci)使用商業化(hua)生產的(de)液體培(pei)養基(ji)會更加可(ke)靠一點。

8.利用細胞的代謝特性來優化培養基

分(fen)析(xi)使用過的培養(yang)基，有(you)助于鑒(jian)定必要(yao)成分(fen)的代(dai)謝速(su)率(lv)，包括(kuo)氨基酸(suan)和維生素。從細(xi)胞生長階(jie)段和蛋白生產(chan)階(jie)段收集到的動態代(dai)謝圖譜可用來(lai)平(ping)衡基礎(chu)培養(yang)基和添加培養(yang)基，指導培養(yang)基的重點，有(you)助于蛋白質的生產(chan)。

9.避免細胞的過度消化

胰蛋白酶(mei)(mei)通過消化負責讓細(xi)胞(bao)與容(rong)器結合的(de)蛋白質，而(er)實現貼(tie)壁細(xi)胞(bao)的(de)傳代(dai)。如果細(xi)胞(bao)暴露在胰酶(mei)(mei)中(zhong)時間太長，則胰酶(mei)(mei)將開始切(qie)割細(xi)胞(bao)表面(mian)蛋白，這會影響細(xi)胞(bao)行駛正常(chang)功能(neng)(neng)的(de)能(neng)(neng)力。

10.培養基中不要一直使用抗生素

隨著細胞培養物更加頻繁(fan)地(di)暴露在(zai)抗(kang)生素(su)中，對抗(kang)生素(su)有著天然(ran)耐藥(yao)性的菌株將開始出現。這(zhe)種(zhong)現象可(ke)掩蓋潛在(zai)的污染(ran)。