夏(xia)天(tian)到了，細(xi)胞(bao)更容易被污染(ran)，很多養細(xi)胞(bao)的(de)(de)(de)朋友在(zai)這方(fang)面困惑頗多，今天(tian)針對貼壁生長的(de)(de)(de)細(xi)胞(bao)談談。 在(zai)討論之前(qian)，大家首先(xian)要(yao)有(you)一個概念(nian)，即潔(jie)凈區，并不(bu)是(shi)(shi)沒(mei)有(you)細(xi)菌，而是(shi)(shi)細(xi)菌的(de)(de)(de)數(shu)量(liang)(liang)非常少(shao)，在(zai)我們(men)的(de)(de)(de)潔(jie)凈操(cao)作臺里，并不(bu)是(shi)(shi)真正(zheng)一個細(xi)菌都(dou)沒(mei)有(you)的(de)(de)(de)，所以在(zai)操(cao)作的(de)(de)(de)時候還是(shi)(shi)要(yao)盡(jin)量(liang)(liang)利索迅速地完成操(cao)作。盡(jin)量(liang)(liang)減少(shao)進入培養體系細(xi)菌的(de)(de)(de)數(shu)量(liang)(liang)。 所以處理細(xi)菌污染(ran)的(de)(de)(de)重要(yao)原則就(jiu)是(shi)(shi)：無限地稀釋細菌的濃度，無限地減少細菌的數量！

對于細菌(jun)污染（常(chang)見(jian)為金黃色葡(pu)萄球(qiu)菌(jun)和大腸桿菌(jun)）；

污染處理流程

1、將(jiang)污染的培(pei)養(yang)液倒(dao)掉(diao)，轉燒瓶(ping)口(kou)，加入10 mlPBS，適當(dang)晃(huang)動清洗培(pei)養(yang)瓶(ping)，然后倒(dao)掉(diao)。轉燒瓶(ping)口(kou)。

2、繼(ji)續(xu)加入10mlPBS，同樣(yang)方法晃動，清洗培養瓶，然后倒(dao)掉。

3、繼續加(jia)入5mlPBS，同樣方法(fa)洗(xi)瓶，主要(yao)是培(pei)養面，然(ran)后倒掉(diao)。

4、重(zhong)復步驟(zou)3再洗。

5、重(zhong)復步驟3再洗。

6、加入3-5ml雙抗，洗(xi)瓶，靜置(zhi)3-5分鐘(zhong)，然后吸出。

7、加入3ml雙(shuang)抗，洗瓶，靜置3-5分鐘，然后吸出。

8、再加入5mlPBS洗瓶，然后吸(xi)出。

9、加(jia)入(ru)10ml培(pei)(pei)養(yang)(yang)液，加(jia)入(ru)2ml雙抗(kang)，放置(zhi)培(pei)(pei)養(yang)(yang)箱培(pei)(pei)養(yang)(yang)，5小時之后，倒掉培(pei)(pei)養(yang)(yang)基，加(jia)入(ru)PBS洗瓶(ping)兩次(ci)(ci)，然后加(jia)入(ru)胰酶(mei)消(xiao)化，吹打后置(zhi)于離心機800-1000r/min離心，然后洗一次(ci)(ci)。置(zhi)于新的(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)瓶(ping)里培(pei)(pei)養(yang)(yang)，培(pei)(pei)養(yang)(yang)體系(xi)加(jia)入(ru)2ml雙抗(kang)。

10、24h之后(hou)(hou)，視情(qing)況(kuang)換液(ye)，若仍(reng)然污染(ran)嚴重(zhong)，培(pei)(pei)養(yang)基(ji)渾(hun)濁，重(zhong)復以上步驟(zou)，若看不(bu)到污染(ran)物，則繼續步驟(zou)1)、3）、4）、6）、8），然后(hou)(hou)加入培(pei)(pei)養(yang)液(ye)培(pei)(pei)養(yang)，培(pei)(pei)養(yang)體系加入2ml雙抗。

11、24h之(zhi)后，若(ruo)仍污(wu)(wu)染(ran)嚴(yan)重，可(ke)再重復一次，若(ruo)還污(wu)(wu)染(ran)只能(neng)棄之(zhi)（不過一般沒有(you)出現這種情況），若(ruo)鏡下不見污(wu)(wu)染(ran)物(wu)，則換液PBS洗(xi)瓶(ping)，正常培養(yang)。

若為霉菌或者(zhe)真菌污染：

     加入(ru)兩性霉素(su)B清洗和培養(yang)，終濃度(du)一(yi)般為2.5μg/ml（在30μg/ml時會有細(xi)胞毒性）。另外也可以(yi)選擇在培養(yang)基(ji)里加3ug/ml的制霉菌(jun)素(su)或(huo)放(fang)線菌(jun)素(su)D。 其它操作(zuo)同；

若為支(zhi)原(yuan)體污(wu)染有幾種支(zhi)原(yuan)體清(qing)除(chu)劑，

     1.BM-Cyclin（就是泰妙菌素+米諾環(huan)素(su)）2.環(huan)丙沙星(xing)，這(zhe)也是(shi)一(yi)種支(zhi)原(yuan)體較為敏感的抗生(sheng)素(su)，3.MRA，這(zhe)個是(shi)商業化的支(zhi)原(yuan)體去除劑(ji)（Mycoplasma Removal Agent）是(shi)喹諾酮族抗生(sheng)素(su)的衍生(sheng)物，使用后發覺(jue)，采用泰妙菌(jun)素(su)和米諾環素(su)的效(xiao)果(guo)更好些，支原體耐藥率低，同時對細胞的抑制也較低。；

除此還是需要(yao)你(ni)在(zai)無菌(jun)觀念和(he)無菌(jun)操(cao)作上下大功(gong)夫加強了(le)，預防為(wei)主，還是要(yao)強調無菌(jun)操(cao)作，尤其注意血清的質量(liang)，這(zhe)個是主要(yao)來源。

在操(cao)作的(de)過程中，一定要(yao)小心操(cao)作動作，輕柔緩慢，切忌大動作魯莽。防止細胞脫落。當然如(ru)果你的(de)細胞仍(reng)有(you)富余或(huo)者凍存的(de)，我還是建(jian)議你把污(wu)染的(de)扔(reng)掉(diao)，再復(fu)蘇(su)方便省事(shi)。這(zhe)(zhe)個拯救細胞還是主要(yao)針對你就只剩這(zhe)(zhe)一瓶細胞無路可退(tui)的(de)時候。