在細(xi)(xi)胞(bao)培(pei)養過程中會出現這樣或那樣的問題，從細(xi)(xi)胞(bao)生長角度(du)來說，針對細(xi)(xi)胞(bao)不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因.

一、培養細胞不貼壁

可能(neng)原因： 

●胰蛋白酶消(xiao)化過(guo)度 

●支(zhi)原(yuan)體(ti)污染 

●培養基pH值過堿（NaHCO3分解(jie)）               

●細胞老化(hua) 

●接種細胞(bao)起始濃(nong)度太(tai)低或(huo)太(tai)高 

解決(jue)方法(fa)： 

●縮短(duan)胰(yi)蛋白(bai)酶(mei)消(xiao)化(hua)時間(jian)或降低胰(yi)蛋白(bai)酶(mei)濃度 

●分離培(pei)養物(wu)，檢測支原(yuan)體。清潔支架或培(pei)養箱。如發(fa)現支原(yuan)體污(wu)染，丟棄培(pei)養物(wu)。 

●使用無(wu)菌醋酸(suan)溶液調整(zheng)pH值或充入無(wu)菌CO2 

●啟用(yong)新(xin)的(de)保種細(xi)胞(bao) 

●調節*接種細胞濃度(du)

二、懸浮細胞成簇(cu)

可能原因： 

●培(pei)養液中含鈣、鎂(mei)離子； 

●支原體污染； 

●蛋白酶過度消化使得細胞裂解； 

●DNA污(wu)染 

解決方法(fa)： 

●用(yong)無(wu)鈣鎂(mei)平衡鹽溶(rong)液洗滌細胞(bao)(bao)，輕巧吹吸細胞(bao)(bao)獲得(de)單細胞(bao)(bao)懸液； 

●分離培(pei)養(yang)物，檢(jian)測支原體； 

●用(yong)DNaseI處理細(xi)胞

三(san)、培養細胞(bao)生長緩慢

可能原(yuan)因：

●由于更換不同培養液或血清； 

●培養液中一些細胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞； 

●培養物中有少量細菌或真菌污染； 

●試劑保存不當； 

●接種細胞起始濃度太低； 

●細胞已老化； 

●支原體污染 

解決方法： 

●比較新培養液與原培養液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗，讓細胞逐漸適應新培養液； 

●換入新鮮配置培養液，或補加谷氨酰胺及生長因子；

●用無抗生素培養液培養，如發現污染，丟棄培養物；

●血清需保存在-10到-20℃。培養液需在2-8℃避光保存。含血清*培養液在2-8℃保存，需在1周內用完；

●增加接種細胞起始濃度； 

●換用新的保種細胞； 

●分離培養物，檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發現支原體污染，丟棄培養物。

四、培養細胞(bao)生長不好

可能(neng)原(yuan)因：

●細胞本身的狀態

細胞(bao)傳代(dai)次數多，細胞(bao)老化；

細(xi)胞(bao)的接(jie)種量：接(jie)種量過低，細(xi)胞(bao)生(sheng)長緩慢；

細胞(bao)傳代時(shi)間過晚：細胞(bao)中(zhong)毒，影響傳代后的細胞(bao)生(sheng)長；

胰(yi)酶消化時間過(guo)(guo)長(chang)或過(guo)(guo)短(duan)：時間過(guo)(guo)長(chang)，細(xi)胞(bao)死(si)亡(wang)；時間過(guo)(guo)短(duan)，細(xi)胞(bao)未*分離而成(cheng)團，細(xi)胞(bao)死(si)亡(wang)；

細(xi)胞(bao)的凍存與(yu)復蘇：慢凍速融。

●污染

支原體污染

霉菌污染

●培養基或血清

更換血清或培(pei)養基(ji)之前未進行驗(yan)證

選擇的培養基是(shi)否合適

培養基配制(zhi)是否準確無(wu)誤

●培養環境

CO2供應是否正常

培養(yang)箱(xiang)或搖床溫度控制是否正確

…………

解決方法：

根據(ju)以(yi)上四(si)個(ge)方面的可能原因，做出針對性(xing)的解決方案

●注(zhu)意細胞的(de)本身狀(zhuang)態：如傳代次數、接種量(liang)等(deng)；

●避免產生污染(ran)（用(yong)正(zheng)規、合法、可溯源的血清(qing)）

●要用合適的(de)血(xue)清或培養基，經(jing)過(guo)驗證

●注意實驗室的環境

五、培(pei)養細胞(bao)死亡

可能原因： 

●培養箱內無CO2； 

●培養箱內溫度波動太大； 

●細胞凍存或復蘇過程中損傷； 

●培養液滲透壓不正確； 

●培養液中有毒代謝產物堆積 

解決方法： 

●檢測培養箱內CO2； 

●檢查培養箱內溫度； 

●取新的保存細胞種； 

●檢測培養液滲透壓； 

●換入新鮮培養液