科研同學養細胞，

都把細胞當(dang)成自己(ji)的娃，

娃(wa)生活地怎么樣，心情好(hao)(hao)不好(hao)(hao)，

快(kuai)不快(kuai)樂，是每天都要關注的(de)事情。

因為擔心一不留神，

細胞娃就生(sheng)存(cun)地(di)不好，

甚至(zhi)于受(shou)到污染，細胞(bao)over了(le)！

如何讓細胞快樂，我們一(yi)起往下看！

1.確保所有實驗室材料都無菌

交叉污染(ran)是(shi)細(xi)胞培(pei)養的(de)大敵。即使是(shi)zui輕微的(de)污染(ran)，也(ye)可能毀了(le)幾(ji)個星期的(de)成果。因培(pei)養箱內溫暖潮(chao)濕，真菌極易生長，因此(ci)必須(xu)注意定期清潔。此(ci)外(wai)，在將培(pei)養瓶(ping)、移液(ye)管及其他的(de)相(xiang)關(guan)物(wu)品放入超凈(jing)臺之前，應用酒精擦(ca)拭(shi)干凈(jing)，以避免污染(ran)。

2.小心處理您的培養物

細胞培養的脆弱性怎么強調也不為過。劇烈搖晃，或連續的溫度波動可能會對生長產生不利的影響。確保培養箱是(shi)水(shui)平的(de)，溫度均一，且遠離(li)電動(dong)儀器。此外，盡量避(bi)免一次處理多個細(xi)胞系(xi)，因為它可能會影響細(xi)胞的(de)基因型(xing)和表型(xing)。您(nin)還應定期(qi)完成STR圖譜分析(xi)，以(yi)確認(ren)細(xi)胞系(xi)的(de)身份。

3.在使用前正確解凍細胞

盡管解凍看起來是個簡單的步驟，但必須操作得當，以免傷害細胞。長時間暴露在高溫條件下會使細胞無法鋪板。因此，凍存管應(ying)當在37°C水浴中(zhong)放置2分鐘，然(ran)后(hou)用(yong)條件培養基(ji)稀釋，以避免(mian)DMSO造(zao)成直(zhi)接傷害(hai)。

4.使用對數生長期的細胞

細胞培養過程共有3個階段：停滯期、對數期和平臺期，分別代表了低細胞生長、高細胞生長和無細胞生長。zui有活力的細胞是健康的，快速分lie的，在對數期以(yi)70-80%的匯合度(du)存在。

5.在傳代之前不要讓細胞*匯合

匯合度是(shi)指貼壁(bi)(bi)細(xi)胞占(zhan)據培(pei)養瓶表(biao)面積的比例(li)。*匯合意(yi)(yi)味著(zhu)100%的表(biao)面都(dou)被貼壁(bi)(bi)細(xi)胞覆(fu)蓋。一定要避免這種(zhong)狀(zhuang)態，因為(wei)它(ta)意(yi)(yi)味著(zhu)細(xi)胞不(bu)能繼續(xu)生長。不(bu)過，當務之(zhi)急(ji)是(shi)使用(yong)活躍生長的細(xi)胞。

6.選擇*的培養基開發策略

在細胞(bao)培養(yang)過程中，培養(yang)基(ji)(ji)是控制產品質量、產量和(he)成(cheng)(cheng)本(ben)的(de)zui重要(yao)因(yin)(yin)素(su)。必須(xu)針對每種(zhong)培養(yang)物來(lai)定(ding)制培養(yang)基(ji)(ji)，以(yi)優化實驗結果。在決(jue)定(ding)以(yi)哪種(zhong)方式來(lai)開(kai)發您(nin)的(de)培養(yang)基(ji)(ji)時，您(nin)有幾個選擇。您(nin)可以(yi)購買(mai)現成(cheng)(cheng)的(de)，自己開(kai)發，也可以(yi)與另(ling)一家公司(si)合作開(kai)發特定(ding)的(de)培養(yang)基(ji)(ji)。在這個過程中，您(nin)需(xu)要(yao)考慮時間和(he)成(cheng)(cheng)本(ben)等因(yin)(yin)素(su)。

7.配制干粉培養基時評估水的質量

液體(ti)(ti)培(pei)養基往(wang)往(wang)會帶來比干粉培(pei)養基更高質量(liang)的(de)結果。這可能與水的(de)質量(liang)有關。由于細(xi)菌(jun)在水中迅速生長(chang)，故(gu)需要監控(kong)內毒素及(ji)其他污染物(wu)。商(shang)業公司有資源來監控(kong)和控(kong)制(zhi)細(xi)菌(jun)生長(chang)，比如過(guo)濾器(qi)。因此使用(yong)商(shang)業化生產的(de)液體(ti)(ti)培(pei)養基會更加(jia)可靠一點(dian)。

8.利用細胞的代謝特性來優化培養基

分析(xi)使用過的(de)(de)(de)(de)培養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)，有助于鑒定必(bi)要成分的(de)(de)(de)(de)代(dai)(dai)謝速率，包(bao)括氨基(ji)(ji)酸和維生素(su)。從細胞生長階段和蛋白(bai)生產階段收(shou)集(ji)到的(de)(de)(de)(de)動態代(dai)(dai)謝圖譜(pu)可用來平衡基(ji)(ji)礎(chu)培養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)和添加培養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)，指導培養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)重點(dian)，有助于蛋白(bai)質的(de)(de)(de)(de)生產。

9.避免細胞的過度消化

胰(yi)蛋白酶(mei)通過消化負責讓細(xi)胞(bao)(bao)與容(rong)器結合的蛋白質，而(er)實現(xian)貼壁細(xi)胞(bao)(bao)的傳代。如果(guo)細(xi)胞(bao)(bao)暴露(lu)在胰(yi)酶(mei)中時間太長，則胰(yi)酶(mei)將(jiang)開始切割細(xi)胞(bao)(bao)表(biao)面蛋白，這會影響細(xi)胞(bao)(bao)行駛正(zheng)常功(gong)能的能力。

10.培養基中不要一直使用抗生素

隨著(zhu)(zhu)細胞培養物更加頻(pin)繁地暴露在抗(kang)生(sheng)素(su)中，對抗(kang)生(sheng)素(su)有著(zhu)(zhu)天然(ran)耐藥(yao)性(xing)的菌(jun)株將開始(shi)出現。這(zhe)種現象可掩蓋潛在的污染。