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AD293 人胚腎細胞
培養條件:
*培養(yang)基:DMEM高糖培養(yang)基90%;胎牛血(xue)清10%。
培養條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
AD293 人胚腎細胞
傳(chuan)代方法(fa):
收到細胞后,取出培養瓶在(zai)倒置顯(xian)微鏡下(xia)觀察細胞生長情況(kuang)。
(一(yi))如果(guo)細(xi)(xi)胞未長滿,用75%酒(jiu)精噴灑整個瓶(ping)消毒后放到超菌臺內,嚴格無菌操作(zuo),打(da)開細(xi)(xi)胞培養瓶(ping),吸出(chu)培養液,僅留下10ml培養液在瓶(ping)內繼續(xu)培養。
(二)如果細胞已長滿(man),即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)傳代培養。具體步驟(zou)如下(xia):
1. 棄去培養液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2. 加1ml消(xiao)化液(ye)(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培(pei)養(yang)瓶(ping)中,倒(dao)轉放于37度培(pei)養(yang)箱(xiang)1-3分(fen)鐘預熱,然后(hou)又(you)將培(pei)養(yang)瓶(ping)倒(dao)轉大約(yue)30秒后(hou),在倒(dao)置顯(xian)微鏡下觀察細胞消(xiao)化情況,若細胞大部分(fen)變(bian)圓分(fen)散,輕敲幾下培(pei)養(yang)培(pei)養(yang)瓶(ping),細胞隨即(ji)脫落下來。
3. 加入6-8ml*培(pei)養(yang)基,吸出,分到新(xin)的培(pei)養(yang)瓶中。1:3~1:6傳代;2~3天1次。
。
注(zhu)意:傳代(dai)后(hou)一半用我們的培養(yang)基(ji),一半用你們的,以免(mian)細胞不(bu)適應而造
成生長(chang)不好。
凍存方法: 凍存液:基(ji)礎培養基(ji)+5%DMSO+20%FBS
儲存(cun):液氮儲存(cun)
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