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HPT-8 細胞,人飼養層上皮細胞
培(pei)養條件(jian):*培(pei)養基: DMEM高糖90%+10%胎牛血清
培養條(tiao)件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
HPT-8 細胞,人飼養層上皮細胞
傳代方法:
收到(dao)細(xi)胞后,取出培(pei)養瓶在倒置顯微鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞生長情況。
(一)如(ru)果細(xi)(xi)胞(bao)未長滿,用(yong)75%酒精噴灑整個瓶消毒后放(fang)到超菌(jun)臺(tai)內(nei),嚴格無菌(jun)操作,打開細(xi)(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)瓶,吸出(chu)培(pei)養(yang)液,僅留下10ml培(pei)養(yang)液在瓶內(nei)繼續培(pei)養(yang)。
(二(er))如(ru)果細胞已長(chang)滿,即可(ke)進行傳代培養(yang)。具體步驟如(ru)下:
1. 棄去培養(yang)液(ye),用PBS(不含鈣(gai),鎂(mei)離子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于(yu)培養瓶(ping)中,倒轉(zhuan)(zhuan)放于(yu)37度培養箱1-3分(fen)(fen)鐘(zhong)預熱(re),然后又(you)將培養瓶(ping)倒轉(zhuan)(zhuan)大(da)約30秒后,在倒置(zhi)顯微(wei)鏡下觀察細胞(bao)消化情況,若(ruo)細胞(bao)大(da)部分(fen)(fen)變圓分(fen)(fen)散(san),輕敲幾下培養培養瓶(ping),細胞(bao)隨即脫落下來。
3. 加入6-8ml*培(pei)養基,吸出,分到新的培(pei)養瓶中。一傳二(er)。
注意:傳代后一(yi)(yi)半用(yong)我(wo)們(men)的培養(yang)基,一(yi)(yi)半用(yong)你們(men)的,以(yi)免細胞不適應而造(zao)
成生長不好。
凍存方法: 凍存液:95%*培養液,5%DMSO
儲存(cun):液氮(dan)儲存(cun)
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