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HMC細胞, 人腎小球系膜細胞
培(pei)養基和添加(jia)劑
RPMI 1640+10%胎牛(niu)血清或新生牛(niu)血清
HMC細胞, 人腎小球系膜細胞
傳代方法:
收到細(xi)胞后,取出(chu)培養瓶在倒置(zhi)顯微鏡下,觀察細(xi)胞生(sheng)長情況。
(一)如(ru)果(guo)細(xi)胞未長(chang)滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后(hou)放到超(chao)菌(jun)臺內,嚴格無菌(jun)操作(zuo),打(da)開細(xi)胞培(pei)(pei)養(yang)瓶,吸出(chu)培(pei)(pei)養(yang)液,僅留下10ml培(pei)(pei)養(yang)液在瓶內繼續培(pei)(pei)養(yang)。
(二)如(ru)果細胞已長(chang)滿,即可進行傳代(dai)培養。具體(ti)步驟如(ru)下:
1. 棄去培養液,用PBS(不含鈣,鎂離(li)子)洗1-2次。
2. 加1ml消(xiao)化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于(yu)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)瓶(ping)中,倒(dao)轉(zhuan)放于(yu)37度培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)箱1-3分(fen)鐘預熱,然后又將(jiang)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)瓶(ping)倒(dao)轉(zhuan)大(da)約30秒后,在倒(dao)置顯(xian)微鏡下觀(guan)察細(xi)胞消(xiao)化情況,若(ruo)細(xi)胞大(da)部分(fen)變圓分(fen)散,輕(qing)敲幾下培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)瓶(ping),細(xi)胞隨即脫落下來。
3. 加入6-8ml*培養(yang)基,吸出,分到新的(de)培養(yang)瓶中。1:3~1:6傳代;2~3天1次。
。
注意:傳(chuan)代后一半用(yong)我(wo)們的培(pei)養基,一半用(yong)你們的,以免(mian)細胞不適應而造。。
成生長不好。
凍(dong)存(cun)方法: 凍(dong)存(cun)液(ye):基礎培養基+5%DMSO+20%FBS 。
儲(chu)存(cun):液氮儲(chu)存(cun)。
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