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C200細胞,人卵巢癌細胞
*培養基(ji):1640 培養基(ji)90%;胎(tai)牛血清10%。
培養條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
C200細胞,人卵巢癌細胞
傳(chuan)代方法:
收到細胞后,取出培養瓶在倒(dao)具置顯(xian)微鏡下觀察細胞(bao)生長(chang)情況。
(一(yi))如(ru)果細(xi)胞未長滿,培養液在瓶內繼續培養。
(二)如果(guo)細(xi)胞(bao)已(yi)長滿,即可(ke)進行傳代培養用75%酒(jiu)精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺(tai)內,嚴(yan)格無菌操(cao)作(zuo),打(da)開細胞培養瓶,吸出培養液,僅留下10ml。體(ti)步驟如下:
1. 棄去培養液,用PBS(不含鈣(gai),鎂(mei)離(li)子)洗1-2次(ci)。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于(yu)培養(yang)瓶中,倒(dao)轉放(fang)于(yu)37度培養(yang)箱1-3分鐘(zhong)預熱,然(ran)后(hou)又將培養(yang)瓶倒(dao)轉大約30秒后(hou),在(zai)倒(dao)置(zhi)顯微鏡下(xia)觀察細胞消化情況,若細胞大部(bu)分變(bian)圓分散(san),輕(qing)敲(qiao)幾下(xia)培養(yang)培養(yang)瓶,細胞隨(sui)即脫落下(xia)來。
3. 加入(ru)6-8ml*培(pei)養基,吸出,分到新的培(pei)養瓶中(zhong)。1:3~1:6傳(chuan)代;2~3天1次(ci)。
。
注意:傳代后一(yi)半(ban)用我們(men)的(de)培(pei)養基,一(yi)半(ban)用你們(men)的(de),以免細(xi)胞不(bu)適應(ying)而造(zao)
成生長不好。
凍(dong)存(cun)方(fang)法: 凍(dong)存(cun)液:基(ji)礎培(pei)養基(ji)+5%DMSO+20%FBS
儲存(cun):液氮儲存(cun)
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