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APRE-19細胞,人視網膜上皮細胞
培養條件:
*培養(yang)基(ji):DMEM高糖培養(yang)基(ji)90%;胎牛(niu)血清10%。
培養(yang)條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
APRE-19細胞,人視網膜上皮細胞
傳代(dai)方法:
收到(dao)細胞(bao)(bao)后,取(qu)出(chu)培養瓶在倒置顯(xian)微鏡下觀察細胞(bao)(bao)生(sheng)長情況。
(一)如果細胞(bao)未長滿(man),用(yong)75%酒精(jing)噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,嚴格無菌操作,打開細胞(bao)培(pei)養瓶,吸出(chu)培(pei)養液,僅(jin)留下10ml培(pei)養液在(zai)瓶內繼(ji)續培(pei)養。
(二(er))如(ru)果細胞(bao)已長滿,即可進行(xing)傳(chuan)代培(pei)養。具體步驟如(ru)下:
1. 棄(qi)去培養液,用(yong)PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2. 加(jia)1ml消化液(ye)(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培(pei)養瓶(ping)中,倒轉放于37度培(pei)養箱1-3分鐘預熱,然后又將(jiang)培(pei)養瓶(ping)倒轉大(da)約30秒(miao)后,在倒置顯(xian)微鏡下觀察細(xi)胞消化情況,若細(xi)胞大(da)部分變圓分散(san),輕(qing)敲(qiao)幾下培(pei)養培(pei)養瓶(ping),細(xi)胞隨即脫落下來(lai)。
3. 加(jia)入(ru)6-8ml*培養基,吸(xi)出,分到(dao)新的(de)培養瓶中。1:3~1:6傳代(dai);2~3天1次。
。
注(zhu)意:傳(chuan)代后一半用我們的培(pei)養基,一半用你們的,以(yi)免細胞(bao)不適(shi)應而造
成生長不好。
凍(dong)存方(fang)法: 凍(dong)存液:基礎(chu)培(pei)養基+5%DMSO+20%FBS
儲(chu)存:液(ye)氮儲(chu)存
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