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HIC細胞, 人小腸癌細胞系
培養條件:
*培(pei)養(yang)基:DMEM高糖培(pei)養(yang)基90%;胎牛(niu)血清10%。
培(pei)養條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
HIC細胞, 人小腸癌細胞系
傳(chuan)代方法:
收(shou)到(dao)細(xi)(xi)胞后,取出(chu)培養(yang)瓶(ping)在倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡下觀察細(xi)(xi)胞生長情況。
(一)如果細(xi)胞未長滿,用75%酒精噴灑(sa)整個瓶(ping)消毒后放到超菌(jun)(jun)臺內(nei),嚴格無菌(jun)(jun)操作,打開細(xi)胞培(pei)養(yang)(yang)瓶(ping),吸出培(pei)養(yang)(yang)液,僅留下10ml培(pei)養(yang)(yang)液在(zai)瓶(ping)內(nei)繼續培(pei)養(yang)(yang)。
(二)如果細(xi)胞(bao)已長滿,即可(ke)進行傳代培(pei)養。具體步驟如下:
1. 棄去培養液,用(yong)PBS(不含鈣(gai),鎂離子)洗(xi)1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于(yu)培(pei)(pei)養瓶(ping)中,倒(dao)轉(zhuan)放于(yu)37度培(pei)(pei)養箱1-3分(fen)鐘預熱,然后又將培(pei)(pei)養瓶(ping)倒(dao)轉(zhuan)大約30秒后,在(zai)倒(dao)置顯微鏡(jing)下觀察細胞消化情況,若細胞大部分(fen)變圓分(fen)散,輕敲(qiao)幾(ji)下培(pei)(pei)養培(pei)(pei)養瓶(ping),細胞隨即脫落下來(lai)。
3. 加(jia)入(ru)6-8ml*培養基,吸出,分到(dao)新的培養瓶中。1:3~1:6傳代;2~3天1次(ci)。
。
注意:傳(chuan)代后一半(ban)用我們(men)的(de)培養基,一半(ban)用你們(men)的(de),以免(mian)細胞不(bu)適應而造
成(cheng)生長不好(hao)。
凍存方法: 凍存液:基(ji)礎(chu)培養基(ji)+5%DMSO+20%FBS
儲(chu)存:液氮儲(chu)存
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