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Anglne細胞,人卵巢癌細胞系
培養條件:
*培(pei)養(yang)(yang)基(ji):DMEM高(gao)糖培(pei)養(yang)(yang)基(ji)90%;胎牛血清10%。
培(pei)養條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
Anglne細胞,人卵巢癌細胞系
傳代方法:
收(shou)到細胞(bao)(bao)后,取出培(pei)養瓶在倒置顯微(wei)鏡(jing)下觀察細胞(bao)(bao)生長情況。
(一)如果細(xi)胞未長滿,用75%酒精噴(pen)灑整個瓶(ping)消毒后放到超菌臺內,嚴格無菌操作,打(da)開細(xi)胞培(pei)(pei)養(yang)瓶(ping),吸(xi)出(chu)培(pei)(pei)養(yang)液,僅留(liu)下10ml培(pei)(pei)養(yang)液在瓶(ping)內繼續(xu)培(pei)(pei)養(yang)。
(二)如(ru)果(guo)細胞已長滿(man),即可進行傳代(dai)培養。具體步驟(zou)如(ru)下:
1. 棄去培養(yang)液,用PBS(不含鈣(gai),鎂(mei)離子)洗1-2次。
2. 加1ml消(xiao)化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yang)(yang)瓶中,倒轉放于37度培養(yang)(yang)箱(xiang)1-3分(fen)鐘預(yu)熱,然(ran)后又將培養(yang)(yang)瓶倒轉大約(yue)30秒后,在倒置顯(xian)微鏡(jing)下(xia)(xia)觀察細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)消(xiao)化情況(kuang),若(ruo)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)大部分(fen)變(bian)圓(yuan)分(fen)散,輕敲幾下(xia)(xia)培養(yang)(yang)培養(yang)(yang)瓶,細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)隨即脫(tuo)落下(xia)(xia)來。
3. 加(jia)入6-8ml*培養基,吸出,分(fen)到新的培養瓶中。1:3~1:6傳代;2~3天1次。
。
注意:傳代后一半用我們的(de)(de)培養基,一半用你們的(de)(de),以免細胞(bao)不適應而造
成生長不好。
凍(dong)存(cun)方法: 凍(dong)存(cun)液:基礎(chu)培(pei)養(yang)基+5%DMSO+20%FBS
儲存(cun):液(ye)氮儲存(cun)
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