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VE 人血管內皮細胞
培養條件:
*培養基(ji):DMEM高糖培養基(ji)90%;胎牛血清10%。
培養(yang)條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
VE 人血管內皮細胞
傳代方法:
收到細胞后,取(qu)出培(pei)養瓶在倒置顯微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)細胞生(sheng)長情況。
(一(yi))如(ru)果細胞未長滿,用75%酒精噴灑(sa)整個瓶消(xiao)毒(du)后放(fang)到超菌(jun)臺內(nei),嚴格無(wu)菌(jun)操作,打開細胞培(pei)養(yang)(yang)瓶,吸出培(pei)養(yang)(yang)液,僅留下10ml培(pei)養(yang)(yang)液在瓶內(nei)繼續培(pei)養(yang)(yang)。
(二)如(ru)果細(xi)胞已長滿(man),即(ji)可進行傳代培養。具體步驟如(ru)下:
1. 棄(qi)去培(pei)養液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于(yu)培養(yang)瓶(ping)中,倒轉放于(yu)37度培養(yang)箱1-3分(fen)鐘(zhong)預(yu)熱,然后(hou)又將培養(yang)瓶(ping)倒轉大(da)約30秒后(hou),在倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察細(xi)胞(bao)消化情況,若細(xi)胞(bao)大(da)部分(fen)變圓分(fen)散(san),輕(qing)敲幾(ji)下(xia)培養(yang)培養(yang)瓶(ping),細(xi)胞(bao)隨即脫落下(xia)來。
3. 加入6-8ml*培(pei)養基,吸出,分到新的培(pei)養瓶中(zhong)。1:3~1:6傳代(dai);2~3天(tian)1次。
。
注意:傳(chuan)代后(hou)一半用我們的(de)培養(yang)基(ji),一半用你們的(de),,,以免(mian)細(xi)胞不適應而造(zao)
成生長不好。
VE
凍(dong)存方法: 凍(dong)存液(ye):基礎培養(yang)基+5%DMSO+20%FBS 。
儲存:液氮儲存。
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