細胞房工作守則及注意事項
一、 常規操作(zuo)
    1. 穿(chuan)著實驗服。自己(ji)的白大(da)衣或(huo)厚(hou)外套，可脫(tuo)在門外的衣帽架上。
　　2. 穿(chuan)著拖鞋。在緩(huan)(huan)沖間換下(xia)自己的鞋子，盡量避免在緩(huan)(huan)沖間走動、停留。
　　3. 細胞房zui多可(ke)4個(ge)人同時(shi)使用。盡量避(bi)免在(zai)內長時(shi)間逗留、交(jiao)談。
二(er)、 培養箱(xiang)使用規則
    1. 從培養(yang)箱取放物(wu)品前，用酒精清(qing)潔雙手（或手套），盡量縮(suo)短開(kai)門(men)時間和(he)減少開(kai)門(men)次數。
　　注(zhu)： 培(pei)養箱中的(de)空(kong)氣是經過過濾的(de)潔凈空(kong)氣。長時(shi)間敞(chang)開(kai)或(huo)頻繁開(kai)關(guan)培(pei)養箱，容易造成污(wu)染(ran)。
　　2. 培(pei)養(yang)瓶皿(min)放入培(pei)養(yang)箱前，用酒精消毒表(biao)面，并(bing)稍等(deng)至酒精揮發后再(zai)放入，以免培(pei)養(yang)箱內滯留過多乙醇蒸氣。
　　3. 2-3人(ren)共用(yong)一層培養箱，按預(yu)定(ding)位置(zhi)擺放培養器皿(min)，方(fang)便查找，以免長(chang)時(shi)間敞開(kai)培養箱。
　　4. 普通培(pei)養中的細胞(bao)(bao)(bao)，若非實驗需(xu)要，每瓶/板細胞(bao)(bao)(bao)每天只需(xu)要觀察生長狀(zhuang)態一次，2人以上共用的細胞(bao)(bao)(bao)，可約好時(shi)間一起觀察。
　　注：頻繁將(jiang)細胞(bao)拿出觀察，容易給培(pei)養箱造成污染，同時(shi)也會影(ying)響細胞(bao)生(sheng)長條件的恒定。
三(san)、 顯微鏡使用規(gui)則
    1. 顯微(wei)鏡(jing)使(shi)用前，用酒精棉從中間(jian)至周(zhou)圍(wei)擦(ca)拭(shi)載物(wu)臺。
　　2. 離開細(xi)胞(bao)房時(shi)或較長時(shi)間(jian)不需使用(yong)時(shi)，及時(shi)關(guan)上電源(yuan)，延長燈泡壽命。盡量避免頻(pin)繁開關(guan)顯微鏡電源(yuan)。
四、 超凈(jing)臺相關操作(zuo)規(gui)則
    1. 超(chao)凈臺使用遵循預(yu)約(yue)(yue)原則。無預(yu)約(yue)(yue)者(zhe)若有必要在他人預(yu)約(yue)(yue)時段內使用，需先征得預(yu)約(yue)(yue)者(zhe)的同意，否(fou)則應無條件(jian)讓(rang)出工(gong)作(zuo)臺，以免耽(dan)誤他人實驗。
    2. 超(chao)凈臺使(shi)用前用紫(zi)外燈照射15分(fen)鐘(zhong)滅菌，使(shi)用前、后需用酒精棉球擦(ca)拭工作區消毒，所有物品放(fang)入超(chao)凈臺內使(shi)用前均(jun)應消毒。
    3. 點燃酒(jiu)精燈前(qian)需檢查瓶中酒(jiu)精是(shi)否足夠，液面應(ying)占瓶高1/3-2/3。
　　注： 消毒用(yong)75%的酒(jiu)精(jing)，酒(jiu)精(jing)燈(deng)用(yong)95%的酒(jiu)精(jing)，向噴壺或(huo)燈(deng)內添加酒(jiu)精(jing)時請留意(yi)。
　　注： 酒(jiu)精和酒(jiu)精棉球由值日(ri)生(sheng)負責補給(gei)，發現(xian)細胞房內存放(fang)量不足時(shi)請及時(shi)通知值日(ri)生(sheng)。
    4. 超凈臺中(zhong)應擺放廢(fei)液杯和廢(fei)品(pin)杯各一只(zhi)，用于暫(zan)時存放廢(fei)棄物，實驗結束(shu)后將杯內(nei)垃圾倒入水池或垃圾桶中(zhong)，并沖(chong)洗(xi)晾干備用。
　　注： 將(jiang)廢(fei)(fei)棄的(de)槍(qiang)頭、管子內的(de)殘(can)留液體倒入廢(fei)(fei)液杯后再棄入廢(fei)(fei)品杯中(zhong)，以免垃圾(ji)桶內留有大量(liang)培養液滋(zi)生細菌。
    5. 可回(hui)收的(de)移(yi)液管、離心管、培養瓶(ping)皿等，放入裝(zhuang)有(you)清水的(de)塑料桶中浸泡(pao)，桶內需有(you)足量的(de)清水以(yi)沒過浸泡(pao)物品。
　　注(zhu)： 可回收器皿必(bi)要時(shi)先(xian)初步涮洗后再(zai)放入桶(tong)內(nei)，尤其是(shi)培養(yang)瓶或(huo)血清管中有大(da)量高營(ying)養(yang)的液體(ti)殘(can)留時(shi)，容易使桶(tong)內(nei)的清水長菌。
　　保證浸(jin)泡的(de)瓶、管內*被清水充滿(man)，而不是在裝(zhuang)有大量(liang)空氣(qi)的(de)情況下被壓倒桶(tong)底。
　　塑(su)料(liao)桶內物品由值日生每天負責送去清洗，使用者實驗結束后若發現桶已裝滿(man)，請(qing)通知(zhi)值日生或順(shun)手將塑(su)料(liao)桶帶出(chu)細胞房。
    6. 裝(zhuang)培養(yang)液的(de)瓶子、配培養(yang)液的(de)器皿勿(wu)放(fang)入塑(su)料桶內浸泡！應(ying)由使用(yong)者本人及(ji)時(shi)清(qing)洗晾干備用(yong)。
　　注： 因桶內(nei)物品通常要浸泡(pao)幾小時(shi)以上才送去(qu)清洗，此時(shi)細(xi)菌可能(neng)已在桶中生長并釋放(fang)內(nei)毒(du)素(su)。細(xi)菌內(nei)毒(du)素(su)很難(nan)通過常規(gui)濕熱滅菌步驟(zou)去(qu)除干凈，即使干烤也不能(neng)保證其*失(shi)活。內(nei)毒(du)素(su)對細(xi)胞(bao)生長及多(duo)種實驗均有較(jiao)大影(ying)響。
   洗(xi)滌(di)程(cheng)序：洗(xi)潔精洗(xi)凈，清(qing)水沖(chong)十次(ci)以上去(qu)除洗(xi)滌(di)劑殘留(liu)，然后沖(chong)去(qu)離子(zi)水3次(ci)，再(zai)用雙蒸水1次(ci)，倒置于(yu)器皿(min)(min)柜中晾干(gan)。關(guan)上器皿(min)(min)柜的門(men)防塵(chen)。
五、 培(pei)養液、試(shi)劑等相(xiang)關操(cao)作規則
    1. 從冰箱(xiang)取放物品動作要(yao)迅速，關(guan)門(men)(men)時(shi)要(yao)檢(jian)查門(men)(men)是否關(guan)好。按類(lei)別存(cun)放試(shi)劑。
    2. 培(pei)養液(ye)(ye)母(mu)(mu)液(ye)(ye)是公用，由值(zhi)日生負責配(pei)制(zhi)，長期存放(fang)于(yu)-20℃。使用時按(an)比例加(jia)入血(xue)清配(pei)成培(pei)養液(ye)(ye)工作液(ye)(ye)，打開(kai)使用后的母(mu)(mu)液(ye)(ye)存放(fang)于(yu)4℃，要注意(yi)避(bi)免污(wu)染。發(fa)現(xian)4℃存放(fang)的培(pei)養液(ye)(ye)量不足時及時從-20℃中預解凍，若-20℃中已(yi)沒有儲(chu)備，請及時通知值(zhi)日生。
　　3. 分裝好的血(xue)清長時間保存于-20℃，使(shi)用(yong)前放于4℃預(yu)解(jie)凍。從-20℃取(qu)用(yong)血(xue)清者需登記，并在(zai)血(xue)清管(guan)上簽上使(shi)用(yong)者名字，若(ruo)使(shi)用(yong)別(bie)人(ren)解(jie)凍的血(xue)清需征(zheng)得(de)同(tong)意以免(mian)耽誤(wu)他人(ren)實(shi)驗。按需解(jie)凍，避免(mian)反復凍融(rong)。
　　4. 原(yuan)則上解凍好的血(xue)(xue)清應全部配成含血(xue)(xue)清的培養基備用(yong)，若有剩余，則暫存于4℃并(bing)盡(jin)快使(shi)用(yong)。盡(jin)量不要使(shi)用(yong)他人開過的血(xue)(xue)清，以免交叉污染。
六、 值日生工作職責
    1. 每(mei)周(zhou)值日生時(shi)間(jian)從周(zhou)六開始，至下(xia)周(zhou)五結束。
　　2. 值日周開始時(shi)需做的事情：在(zai)周六、日或之前(qian)準備(bei)好滅菌的槍頭、離心管、干(gan)烤(kao)好的玻璃(li)器皿，供未來一(yi)周的使用(yong)。配制消毒用(yong)的75%的酒(jiu)精，制作酒(jiu)精棉球(qiu)，給細胞房內添加足夠的95%乙醇供酒(jiu)精燈使用(yong)。
　　注： 新離心管(guan)滅(mie)菌前，先用(yong)去離子水(shui)過2-3次(ci)，再用(yong)雙(shuang)蒸水(shui)沖1次(ci)，烘干(gan)后(hou)用(yong)牛皮紙包(bao)好、滅(mie)菌。
　　注(zhu)：75%的(de)酒精(jing)可用(yong)750ml 95%的(de)酒精(jing)加(jia)去離(li)子水(shui)至950ml配制而成。
　　3. 值(zhi)日周(zhou)內每(mei)天需(xu)做的事情(qing)：開大紫外燈(deng)消毒細(xi)胞(bao)房15-30min；將裝滿浸(jin)泡物(wu)品(pin)(pin)的塑(su)料桶拎出細(xi)胞(bao)房送洗，并將空桶放回細(xi)胞(bao)房；更換(huan)垃圾袋；檢查培(pei)養(yang)箱內水量是(shi)否足夠；檢查滅(mie)菌物(wu)品(pin)(pin)的儲備情(qing)況，以便(bian)及時補充；檢查培(pei)養(yang)液(ye)母液(ye)、血清、酒精等(deng)公用試(shi)劑的儲備情(qing)況。
　　4. 值(zhi)日周結束前需(xu)完成(cheng)的事(shi)情：星(xing)期五或(huo)前后一(yi)天(tian)內(nei)打掃細(xi)胞(bao)房。包括拖(tuo)地，擦桌子、吊柜、清潔和整理(li)抽(chou)屜(ti)，擦超凈臺、冰箱(xiang)及桌上的儀器，給(gei)水(shui)(shui)浴(yu)鍋加(jia)水(shui)(shui)或(huo)換水(shui)(shui)，洗細(xi)胞(bao)房的實(shi)驗服和拖(tuo)鞋(xie)，紫外(wai)消毒細(xi)胞(bao)房。切記(ji)給(gei)培養(yang)箱(xiang)換MilliQ水(shui)(shui)，保證水(shui)(shui)質清潔！
　　注：若(ruo)上(shang)周值(zhi)日(ri)生(sheng)及時給培養(yang)箱內水(shui)槽加足水(shui)，根據經驗未來一(yi)周內培養(yang)箱不會干(gan)水(shui)，但(dan)值(zhi)日(ri)生(sheng)仍應經常檢查，以便及時發現異常情(qing)況。
　　5. 每2周清(qing)潔一次培(pei)(pei)養(yang)箱：先將(jiang)培(pei)(pei)養(yang)箱中的(de)物品(pin)取出暫(zan)存于超凈(jing)臺內(nei)，對于比較敏(min)感(gan)的(de)細胞可以暫(zan)存于404細胞房的(de)培(pei)(pei)養(yang)箱；將(jiang)培(pei)(pei)養(yang)箱內(nei)的(de)不(bu)銹鋼(gang)板取出，包括(kuo)4塊(kuai)橫板和左(zuo)右2塊(kuai)立著的(de)架子，用酒精棉球清(qing)潔鋼(gang)板和培(pei)(pei)養(yang)箱內(nei)壁；打開培(pei)(pei)養(yang)箱清(qing)潔內(nei)壁時動作要迅(xun)速，避(bi)免長(chang)時間敞開門使得大量不(bu)潔凈(jing)空氣進入，縮短過濾器(qi)的(de)壽命；用紫外(wai)燈照射培(pei)(pei)養(yang)箱內(nei)部15min，手提紫外(wai)燈放入培(pei)(pei)養(yang)箱前要用酒精棉擦(ca)拭干凈(jing)。
　　6. 配(pei)(pei)制(zhi)培(pei)養(yang)液(ye)(ye)母液(ye)(ye)：培(pei)養(yang)液(ye)(ye)有RPMI1640和DMEM兩(liang)種，配(pei)(pei)方見404公共配(pei)(pei)液(ye)(ye)房；配(pei)(pei)制(zhi)培(pei)養(yang)基要提前干(gan)烤量筒、燒杯、250ml血清瓶，濕熱滅菌濾器(qi)、血清瓶瓶蓋，國產濾膜使用前用MilliQ水浸泡15min以上或過一晚。
七、常(chang)用溶液的(de)配制
    1. RPMI 1640：干粉一(yi)包，碳酸氫鈉(na) 2.0g，Hepes 2.38g，青霉(mei)素100u/ml，鏈(lian)霉(mei)素100ug/ml，攪拌(ban)1-2小(xiao)時后調節pH值至7.2，定容至1L，過濾滅菌分(fen)裝；
　　2. DMEM：干粉一包，碳酸氫鈉(na) 3.7g，Hepes 2.38g，丙(bing)酮酸鈉(na)110mg，青霉素100u/ml，鏈霉素100ug/ml，攪拌1-2小時后調(diao)節pH值至(zhi)7.2，定容至(zhi)1L，過濾滅菌分裝；
　　3. 胰蛋白酶：用(yong)D-Hanks配制，濃(nong)度為0.25％(W/V), 攪(jiao)拌2小(xiao)時后調節(jie)pH值(zhi)至(zhi)7.2，定(ding)容(rong)至(zhi)1L，過濾(lv)滅菌分裝；
　　4. 青霉素：80萬(wan)單位/瓶，加入4ml PBS，配(pei)成濃度為200000U/ml的母液；
　　5. 鏈霉素：按質量(liang)體積比配制，用PBS配成濃度(du)為(wei)200mg/ml的母(mu)液。