細胞培養常規方法

1. 凍存細(xi)胞(bao)的復蘇(su)

1. 應遵守(shou)慢(man)凍快融(rong)的原則。先將水浴鍋調(diao)至(zhi)37-37。5度，取出(chu)凍存(cun)的細胞迅速放入(ru)后將細胞面浸(jin)至(zhi)水面以下不斷搖(yao)動至(zhi)融(rong)化。

2. 在(zai)無菌(jun)臺內將*培(pei)(pei)養(yang)基加入50ml的小培(pei)(pei)養(yang)瓶(ping)內，約5ml左(zuo)右(you)，然后(hou)用無菌(jun)吸管從凍存管內取出(chu)細(xi)胞(bao)，置培(pei)(pei)養(yang)并(bing)內輕輕搖晃(huang)，使細(xi)胞(bao)均勻后(hou)置培(pei)(pei)養(yang)箱內培(pei)(pei)養(yang)。

2. 傳代:

對于(yu)貼壁細胞應(ying)先吸(倒(dao))盡培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)，吸的越干凈越好(hao)，以免(mian)中和(he)后(hou)加(jia)(jia)入的消(xiao)化(hua)液(ye)，使強度(du)減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培(pei)(pei)(pei)養(yang)瓶加(jia)(jia)入消(xiao)化(hua)液(ye)約1-3ml，按此(ci)比例進行(xing)消(xiao)化(hua)，(根據經驗)，晃動(dong)使消(xiao)化(hua)液(ye)鋪均勻置37度(du)培(pei)(pei)(pei)養(yang)箱約2-5分(fen)鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數脫(tuo)落后(hou)，輕輕振動(dong)瓶底(di)使細胞全部脫(tuo)落，加(jia)(jia)入2-3ml*培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)后(hou)，輕輕吹打，使細胞基(ji)本成單個懸(xuan)浮，然后(hou)分(fen)置其它無菌培(pei)(pei)(pei)養(yang)瓶內，加(jia)(jia)入*培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)后(hou)繼續(xu)培(pei)(pei)(pei)養(yang)或實(shi)驗。

一般(ban)傳代可直接將(jiang)細胞原(yuan)液分(fen)置其(qi)它培(pei)養(yang)瓶(ping)內，加(jia)(jia)入(ru)*培(pei)養(yang)基(ji)繼(ji)續(xu)培(pei)養(yang)，如(ru)要高濃(nong)度可先(xian)離(li)心1000rpm，5min后加(jia)(jia)入(ru)*培(pei)養(yang)基(ji)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)勻后，分(fen)置其(qi)它培(pei)養(yang)瓶(ping)內加(jia)(jia)入(ru)*培(pei)養(yang)基(ji)繼(ji)續(xu)培(pei)養(yang)。

1. 貼壁細胞:

2. 懸浮細胞:

3. 凍(dong)存(cun) 

將貼壁(bi)細胞消(xiao)化(hua)后離心(xin)收集(ji)，懸浮(fu)細胞直接(jie)離心(xin)收集(ji)，以*培養基或胎牛血清重懸細胞至(zhi)終濃度(du)約106/ml。加(jia)入10%的DMSO。以每管(guan)1～2ml分裝至(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)中。用絕熱材料包(bao)裹置-70攝氏(shi)度(du)冰(bing)箱冷凍(dong)過(guo)夜。次日保存(cun)到液(ye)氮中。