培養細胞的常規檢查和觀察方法
細胞(bao)培養后,需要對其生(sheng)長狀(zhuang)況、形態甚(shen)至生(sheng)物學性(xing)狀(zhuang)連續地進行觀察.由于細胞(bao)小而復雜(za),若不借助(zhu)適當的(de)(de)手(shou)段,則難(nan)以觀察期形態、結構,更難(nan)發(fa)現細胞(bao)內各種組(zu)分的(de)(de)分子(zi)組(zu)成及功能.目前,已(yi)有多種研究細胞(bao)的(de)(de)技術,從光學顯微鏡到(dao)電子(zi)顯微鏡,從一般(ban)細胞(bao)化學法到(dao)免(mian)疫化學法.

  細胞培養后,需要對其生長狀況、形態甚至生物學性狀連續地進行觀察.由于細胞小而復雜,若不借助適當的手段,則難以觀察期形態、結構,更難發現細胞內各種組分的分子組成及功能.目前,已有多種研究細胞的技術,從光學顯微鏡到電子顯微鏡,從一般細胞化學法到免疫化學法.
    細胞在體外培養過程需要每天進行常規檢查和顯微鏡觀察,及時了解細胞生長狀態、數量改變、細胞形態、細胞有無移動、污染、培養基pH值是否變酸、培養基變黃是否需要更換等.細胞常規檢查觀察的方法有4種.
一、肉眼觀察
    一般常規檢查用肉眼即可觀察,主要看培養基的顏色和透明度的變換.正常情況下,培養基pH值介于7.2-7.4之間,呈桃紅色,清亮透明.加入細胞在培養瓶中置一般恒溫箱培養時,隨著細胞生長時間的延長,細胞代謝產生的酸性物質會使培養基pH值下降,引起顏色變淺變黃.在超越緩沖范圍后便宜酸化變黃,如不及時調節pH值,會影響細胞的生長,甚至造成細胞退變死亡.所以,一旦發現培養基變黃,應及時換液傳代.一般更換培養基的時間依營養物的消耗而定,正常情況生長穩定的細胞2-3天換液一次,生長緩慢的細胞3-4天換液一次.培養基中加Hepes或用5%CO2恒溫箱培養可使pH值維持穩定,利于細胞生長.用磷酸鹽緩沖系統培養時,可因瓶及塞子漏氣,CO2溢出,也可能由于培養瓶塞洗刷不潔、殘留堿性物,是培養基變堿發紅,致使細胞難以生長,甚至死亡.細胞換液傳代后,若發現培養基很快變黃,要注意是否有細菌污染或培養皿沒有洗干凈.貼壁細胞污染,也可在顯微鏡下仔細觀察有無污染現象出現.
二、顯微鏡觀察
    生長良好的細胞,在顯微鏡喜愛可觀察到細胞透明度大,折光性強,輪廓不清.相差顯微鏡觀察時可見細胞部分細微結構.若細胞生長狀態不良,可見細胞輪廓增強,細胞折光性變弱,細胞質中出現空泡、脂滴和其他顆粒狀物質,細胞之間空隙增大,細胞形態不規則,甚至失去原有細胞的特點,產生園縮脫落,有時細胞表面及周圍出現絲狀絮狀物.若細胞營養不良狀況沒有得到及時糾正,進一步發展可見到部分細胞死亡,崩解漂浮在培養基中,發現這種情況應及時處理,只有生長良好的細胞才能進行傳代培養和實驗研究.
三、細胞的生長狀態觀察
    細胞培養時,經初代培養或傳代培養,都有一個長短不同的潛伏期,在培養過程中注意觀察細胞增殖生長的狀態極為重要.各種細胞增殖的時間不盡相同.傳代細胞系,胚體組織或幼體細胞潛伏期短,一般在接種培養第2天即可見細胞生長增殖,3-4天便可連接成片.成體組織的潛伏期,老年組織和癌組織潛伏期更長,可達1周左右.原代細胞培養中zui先可見組織塊邊緣“長出”細胞,這種細胞是從原代組織塊中游走出來的,并不是細胞增勢產生的.這種早期游離出的細胞多以成纖維細胞為主,易生長,適應性強,呈放射狀或旋渦狀分布,很快生長并互相連接成網狀.傳代細胞在傳代后,一般經過懸浮、貼壁伸展很快進入潛伏期、對數生長期、細胞大量繁殖、逐漸相連成片而長滿瓶底.一般發現細胞覆蓋瓶底的80%就應及時傳代,否則會影響細胞生長甚至導致細胞脫落.當發現懸浮細胞生長顯著、密度增大、分布稠密、培養基變黃也應及時傳代.
四、微生物污染的觀察
    細(xi)胞接種、傳代、換液(ye)加藥后經常觀(guan)(guan)察,密切注意(yi)是否有(you)微生(sheng)物污染發(fa)生(sheng).一旦(dan)發(fa)現培養(yang)基渾濁(zhuo)、液(ye)體內漂浮著(zhu)菌絲或細(xi)菌,或生(sheng)長明顯變緩,胞質內顆粒增(zeng)多,有(you)中毒(du)表現等(deng)應懷疑是否有(you)微生(sheng)物污染,進一步觀(guan)(guan)察檢查并及時處理.