T淋巴細胞轉化實驗的基本原理
     T細胞在體外培養時,受(shou)到非(fei)特異性(xing)有絲分(fen)裂原（如PHA、ConA）刺(ci)激后(hou),可出(chu)現細(xi)胞體積增(zeng)大(da),代(dai)謝旺盛,蛋白和核酸合成(cheng)增(zeng)加,即向淋巴母細(xi)胞轉(zhuan)化.淋巴細(xi)胞轉(zhuan)化率的高低可以(yi)反(fan)映(ying)機(ji)體的細(xi)胞免(mian)疫(yi)水(shui)平,因(yin)此(ci)可作(zuo)為測定機(ji)體免(mian)疫(yi)功能的指標之(zhi)一.
T 細(xi)(xi)胞在體外培養時,受(shou)到非特異性有絲分裂原（如PHA、ConA）刺激后,可出(chu)現細(xi)(xi)胞體積增(zeng)大,代謝旺(wang)盛,蛋白和核酸合成(cheng)增(zeng)加,即向(xiang)淋巴母細(xi)(xi)胞轉化.淋巴細(xi)(xi)胞轉化率的高低可以(yi)反映機體的細(xi)(xi)胞免疫(yi)水平,因此(ci)可作為(wei)測定機體免疫(yi)功能的指標之一.
淋(lin)巴細(xi)胞(bao)轉化(hua)試驗(yan)有形態計數法、MTT 法和同位素法三種(zhong).MTT 法即四甲基(ji)偶氮唑(zuo)鹽(yan)微(wei)量酶反(fan)應比(bi)色(se)法.MTT 是一(yi)種(zhong)噻(sai)唑(zuo)鹽(yan),化(hua)學名3-（4,5-二甲基(ji)-2-噻(sai)唑(zuo)）-2,5-二苯基(ji)溴化(hua)四唑(zuo),水(shui)溶(rong)液為(wei)黃(huang)橙色(se).小鼠脾細(xi)胞(bao)受到(dao)ConA 作用后發生增殖活(huo)化(hua),其胞(bao)內線粒體琥珀酸脫氫(qing)酶活(huo)性相應升高,MTT 作為(wei)其底物參與反(fan)應,形成藍色(se)的甲臜(za)（Formazan）顆(ke)粒沉積于(yu)細(xi)胞(bao)內或細(xi)胞(bao)周圍,經鹽(yan)酸─異丙醇溶(rong)解后為(wei)藍色(se)溶(rong)液,可用酶標測定儀測定細(xi)胞(bao)培養物的OD 值(zhi),測定波長570nm.根據OD 值(zhi)的大小計算反(fan)應體系(xi)中細(xi)胞(bao)增殖程度(du).
3H-TdR 摻入(ru)(ru)(ru)法：細(xi)(xi)胞增殖(zhi)的(de)(de)基本條件或(huo)前(qian)提為(wei)細(xi)(xi)胞質和細(xi)(xi)胞核(he)的(de)(de)復制(zhi),這是(shi)正常細(xi)(xi)胞增殖(zhi)過程缺一不可(ke)的(de)(de)前(qian)提.一般來說,一個細(xi)(xi)胞周期(qi)(qi)(qi)可(ke)大致(zhi)分為(wei)四(si)期(qi)(qi)(qi),即(ji)G1 期(qi)(qi)(qi)、S期(qi)(qi)(qi)、G2 期(qi)(qi)(qi)和M期(qi)(qi)(qi).其中S期(qi)(qi)(qi)為(wei)DNA合(he)成期(qi)(qi)(qi),主要(yao)功(gong)能(neng)活(huo)動為(wei)DNA合(he)成.3H-TdR即(ji)（甲(jia)基-3H）胸腺嘧啶核(he)苷（[3H-methyl]thymidine）,是(shi)DNA合(he)成的(de)(de)前(qian)體.加入(ru)(ru)(ru)細(xi)(xi)胞培養液中后被細(xi)(xi)胞攝取(qu)作為(wei)DNA合(he)成的(de)(de)原料.細(xi)(xi)胞合(he)成的(de)(de)DNA越(yue)多(duo),則所(suo)摻入(ru)(ru)(ru)的(de)(de)3H-TdR就(jiu)越(yue)多(duo),因此,檢測所(suo)摻入(ru)(ru)(ru)的(de)(de)3H-TdR就(jiu)可(ke)反映細胞增殖的程度.因該方(fang)法有同(tong)位素污(wu)染問題,故我們(men)實習中仍(reng)用MTT法.