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CHMAS細胞,人肥大細胞白血病細胞
培養條(tiao)件:
*培(pei)養基:DMEM高糖培(pei)養基90%;胎(tai)牛血(xue)清10%。
培養條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
CHMAS細胞,人肥大細胞白血病細胞
傳代方(fang)法:
收到細(xi)胞后,取出培養瓶在倒置顯微鏡下觀(guan)察細(xi)胞生長情(qing)況。
(一)如果細胞未(wei)長滿(man),用75%酒精噴(pen)灑整(zheng)個瓶消毒后放到(dao)超(chao)菌臺(tai)內(nei),嚴格無菌操作,打開(kai)細胞培(pei)養(yang)瓶,吸出(chu)培(pei)養(yang)液(ye),僅留下10ml培(pei)養(yang)液(ye)在瓶內(nei)繼續培(pei)養(yang)。
(二)如果細胞已長滿(man),即可進行傳代培養。具體步驟如下:
1. 棄(qi)去培養液(ye),用PBS(不(bu)含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于(yu)培(pei)(pei)養瓶(ping)(ping)中(zhong),倒(dao)轉放于(yu)37度(du)培(pei)(pei)養箱1-3分(fen)鐘預熱,然后又將培(pei)(pei)養瓶(ping)(ping)倒(dao)轉大(da)約30秒后,在倒(dao)置顯微鏡下(xia)觀察細胞消化情況,若(ruo)細胞大(da)部分(fen)變圓分(fen)散,輕敲(qiao)幾下(xia)培(pei)(pei)養培(pei)(pei)養瓶(ping)(ping),細胞隨即(ji)脫(tuo)落下(xia)來。
3. 加入6-8ml*培養基,吸出(chu),分到(dao)新的培養瓶中。1:3~1:6傳代;2~3天1次(ci)。
。
注意:傳代后一半(ban)用我們的培養基,一半(ban)用你們的,以(yi)免細胞不適應而造
成生長不(bu)好。
凍(dong)存方法(fa): 凍(dong)存液(ye):基礎(chu)培養基+5%DMSO+20%FBS
儲存(cun):液(ye)氮儲存(cun)
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