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U-373MG 細胞,人腦膠質瘤細胞系
培(pei)養條件:
*培養基:DMEM高糖培養基90%;胎牛血清(qing)10%。
培養條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
U-373MG 細胞,人腦膠質瘤細胞系
傳代方(fang)法:
收到細胞后,取(qu)出培(pei)養瓶在倒置顯微鏡下觀察細胞生長(chang)情況。
(一)如果細胞(bao)未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后(hou)放到超菌臺內,嚴格無菌操作,打開細胞(bao)培養(yang)(yang)(yang)瓶,吸出(chu)培養(yang)(yang)(yang)液(ye),僅留下10ml培養(yang)(yang)(yang)液(ye)在瓶內繼續培養(yang)(yang)(yang)。
(二(er))如(ru)果細胞已長滿(man),即可進行(xing)傳代(dai)培養。具(ju)體(ti)步驟如(ru)下(xia):
1. 棄去培養液,用PBS(不(bu)含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2. 加(jia)1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培(pei)(pei)養瓶中(zhong),倒(dao)轉(zhuan)(zhuan)放于37度培(pei)(pei)養箱(xiang)1-3分鐘預熱,然后又將培(pei)(pei)養瓶倒(dao)轉(zhuan)(zhuan)大約(yue)30秒后,在倒(dao)置顯(xian)微鏡下觀察細(xi)胞消化情況(kuang),若細(xi)胞大部分變圓分散,輕敲幾下培(pei)(pei)養培(pei)(pei)養瓶,細(xi)胞隨即脫落下來。
3. 加入6-8ml*培(pei)養基(ji),吸出,分到新的培(pei)養瓶中。1:3~1:6傳代;2~3天1次。
。
注意:傳代后一半用我們的(de)培養基,一半用你們的(de),以免細胞(bao)不適應而造(zao)
成生長(chang)不好。
凍存方法: 凍存液:基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
儲(chu)存(cun):液(ye)氮儲(chu)存(cun)
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