人皮膚成纖維 HDF-a
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細胞培養(yang)說明書

一、細胞培養條件

二、細胞收到后處理

細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿*培養液并封好瓶口是細胞運輸的最好辦法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作，培養箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的*培養液收集至離心管中，加入6ml*培養基，放入37℃、5%CO2孵箱培養；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養步驟。（注意發貨的是密封培養瓶的話，處理完后放入培養箱培養記得培養瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的*培養基，另外一瓶用自己配的*培養基）

三(san)、細胞培養步驟

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL*培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的*培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到(dao)細胞后(hou)，用75%酒精噴灑整個(ge)管子消毒后放到(dao)超凈臺或安全(quan)柜內，嚴格(ge)無菌操作；將(jiang)小管細胞轉移(yi)至(zhi)T25培養瓶(ping)或(huo)6cm培養皿(min)，加入(ru)5ml左右*培養基混勻，放(fang)入培養箱過夜培養后查(cha)看(kan)細胞密度(du)：若(ruo)密度(du)未(wei)超過80%，換液繼續培(pei)養，視(shi)情況傳代或者凍存。若密(mi)度超過80%，可直接進行傳(chuan)代（方(fang)法(fa)同上(shang)）。

售后服(fu)務(wu)告知(zhi)書

一、收到細胞處理方法

1. 收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置若干小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態，100×，200×各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jin)行售后的依據。

2. 收(shou)到細(xi)胞(bao)未(wei)開封，出現污染狀況我們(men)負責(ze)免費(fei)重發一次(ci)細(xi)胞(bao)。

3. 由于細胞狀態受環境、操作和運輸等多方面因素的影響，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內的細胞狀態，故客戶需要售后是需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發現問題后與客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。

4. 如客戶對細胞的種(zhong)類、純度、活性(xing)等(deng)特性(xing)有疑問(wen)，需(xu)提供相(xiang)應(ying)的生物學實驗(yan)檢測(ce)結果作為(wei)依據。

二(er)、細胞出現問題，可重發(fa)的情況有哪(na)些？判(pan)定標準是什么(me)？

1. 細(xi)胞運輸途中遭遇(yu)的(de)各種問題，細(xi)胞丟失、瓶身破損(sun)、培養液嚴重(zhong)漏液等，重(zhong)發(fa)；

2. 細胞污染問題，請在收到產品48小時內，給我們提出真實的實驗結果，核實后重發；

3. 常溫發貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇后24小時后，絕大多數細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態照片），重發；

4. 干冰凍存發貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發貨的細胞靜置4小時候并且未開封，出現污染，重發；

5. 細胞活性問題，請在收到產品7天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發；

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產品合格。4-7天內出現問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的，并跟技術人員溝通的，由技術人員判定為我方責任的，重發。技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協商處理或者按合同價的50%收費重發。

三、細胞出現問題，不予以重發的情況有(you)哪些？

1. 客戶造成細(xi)胞污(wu)染，不重發；

2. 客戶不(bu)正確(que)操(cao)作致細胞狀態不(bu)好(hao)，不(bu)重發；

3. 非本庫推薦細胞培養體(ti)(ti)系致(zhi)的細胞狀態不好，不重發；

4. 細胞狀態不好，未提供細胞培養前3天照片的(de)，不重發(fa)；

5. 細胞(bao)培養(yang)時經其(qi)它處理的，不重發(fa)；

6. 細(xi)胞收到2天內，未告知，不重發；

7. 視具(ju)體情況(kuang)而(er)定。

注意：若對細胞鑒定存(cun)在爭議，可以在收到細胞3個月內提供真實有效的(de)STR檢(jian)測證明，本(ben)公司承諾無(wu)條件退還(huan)細(xi)胞款項，其他情況本(ben)公司將不(bu)予受理