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HMC 人腎(shen)小球系膜細胞(bao)
培養基和添加劑
RPMI 1640+10%胎(tai)牛(niu)血清或新生牛(niu)血清
HMC 人腎小球系膜細胞
傳代方法:
收(shou)到細(xi)胞后,取出培(pei)養瓶在倒置顯微(wei)鏡下觀(guan)察細(xi)胞生長情況。
(一)如果細(xi)胞未長滿,用(yong)75%酒(jiu)精噴灑整個(ge)瓶(ping)消(xiao)毒(du)后(hou)放到(dao)超菌(jun)臺內,嚴(yan)格(ge)無菌(jun)操作,打(da)開細(xi)胞培養(yang)(yang)瓶(ping),吸出培養(yang)(yang)液,僅留下(xia)10ml培養(yang)(yang)液在瓶(ping)內繼(ji)續培養(yang)(yang)。
(二)如(ru)果細胞(bao)已(yi)長滿,即(ji)可進行傳代(dai)培養(yang)。具體(ti)步(bu)驟如(ru)下:
1. 棄去(qu)培養細(xi)胞隨(sui)即(ji)脫落下(xia)來液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次(ci)。
2. 加1ml消(xiao)(xiao)化(hua)液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong),倒轉(zhuan)放于37度培(pei)養(yang)箱1-3分鐘預熱,然后又(you)將培(pei)養(yang)瓶(ping)倒轉(zhuan)大約30秒后,在(zai)倒置顯微鏡下(xia)觀察(cha)細胞消(xiao)(xiao)化(hua)情況,若(ruo)細胞大部分變圓分散(san),輕敲幾下(xia)培(pei)養(yang)培(pei)養(yang)瓶(ping),。
3. 加入6-8ml*培(pei)(pei)養基,吸出,分到新的(de)培(pei)(pei)養瓶中。1:3~1:6傳代;2~3天1次。
。
注意(yi):傳(chuan)代后一半用(yong)我們的(de)培養基,一半用(yong)你們的(de),以(yi)免(mian)細(xi)胞不適應而造
成生長不好。
HMC 人腎小球系膜細胞
凍存方(fang)法: 凍存液:基礎(chu)培(pei)養基+5%DMSO+20%FBS
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