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MDA-MB-175 人乳腺癌細胞
培養條件:
*培(pei)養(yang)基:DMEM高糖培(pei)養(yang)基90%;胎牛血清10%。
培養條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
MDA-MB-175 人乳腺癌細胞
傳代方法:
收到細胞(bao)后,取出(chu)培(pei)養瓶在倒置(zhi)顯微鏡下觀察細胞(bao)生長情況。
(一)如果細胞未長(chang)滿,用75%酒精(jing)噴灑整個瓶消毒(du)后放到超菌臺內,嚴格無菌操作,打開細胞培(pei)養瓶,吸出培(pei)養液,僅留下10ml培(pei)養液在瓶內繼續培(pei)養。
(二)如果細胞已長(chang)滿,即(ji)可進行(xing)傳代培養。具體步驟如下:
1. 棄(qi)去培養液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2. 加(jia)1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培(pei)養(yang)(yang)瓶(ping)中,倒(dao)轉(zhuan)放于37度培(pei)養(yang)(yang)箱1-3分(fen)(fen)鐘預熱,然后又(you)將培(pei)養(yang)(yang)瓶(ping)倒(dao)轉(zhuan)大約30秒后,在倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡下觀察細胞消化情(qing)況,若細胞大部分(fen)(fen)變圓分(fen)(fen)散,輕敲幾下培(pei)養(yang)(yang)培(pei)養(yang)(yang)瓶(ping),細胞隨即脫落(luo)下來(lai)。
3. 加入6-8ml*培養基,吸出(chu),分到(dao)新的培養瓶中。1:3~1:6傳(chuan)代;2~3天1次。
。
注意:傳代后一半用我們的培養基,一半用你(ni)們的,以免(mian)細胞不適應而造
成生長不好。
凍存方(fang)法: 凍存液:基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
儲存:液氮儲存
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