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Y1 小鼠腎上腺皮質細胞 的詳細介紹
Y1 小鼠腎上腺皮質細胞
培養條件:
*培(pei)(pei)養(yang)基:DMEM高糖(tang)培(pei)(pei)養(yang)基90%;胎牛血(xue)清10%。
培養條(tiao)件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
傳代方法:
收到細(xi)胞后,取出(chu)培養(yang)瓶在倒置顯微鏡(jing)下觀察(cha)細(xi)胞生(sheng)長情況。
(一)如果細(xi)(xi)胞未長滿,用75%酒精噴灑(sa)整(zheng)個(ge)瓶(ping)(ping)(ping)消毒后放到超(chao)菌(jun)臺內(nei),嚴格無(wu)菌(jun)操作,打開(kai)細(xi)(xi)胞培(pei)養瓶(ping)(ping)(ping),吸出培(pei)養液(ye),僅留下10ml培(pei)養液(ye)在瓶(ping)(ping)(ping)內(nei)繼續培(pei)養。
(二)如(ru)果細胞已長(chang)滿,即可進行傳代(dai)培(pei)養。具(ju)體步驟如(ru)下:
1. 棄去(qu)培(pei)養液,用PBS(不含鈣(gai),鎂離子)洗1-2次。
2. 加1ml消(xiao)化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于(yu)培(pei)養(yang)瓶中,倒轉放(fang)于(yu)37度(du)培(pei)養(yang)箱1-3分鐘預熱(re),然(ran)后又將培(pei)養(yang)瓶倒轉大約30秒后,在倒置顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細胞(bao)(bao)消(xiao)化情況,若細胞(bao)(bao)大部分變圓分散,輕敲幾下(xia)培(pei)養(yang)培(pei)養(yang)瓶,細胞(bao)(bao)隨即脫落下(xia)來。
3. 加入6-8ml*培養基(ji),吸出,分到新的培養瓶中(zhong)。1:3~1:6傳代;2~3天1次。
。
注意:傳代(dai)后一(yi)半(ban)用(yong)我們(men)的培養基(ji),一(yi)半(ban)用(yong)你們(men)的,以免(mian)細(xi)胞不適應(ying)而造(zao)
成生長不好。
凍存方(fang)法: 凍存液:基礎(chu)培養(yang)基+5%DMSO+20%FBS
儲存:液氮儲存
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