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Cyc-tAg 小鼠T淋巴細胞瘤(SV40T抗原轉染)
*培養基: RPMI 1640+10%胎(tai)牛血清(qing)
培養條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
Cyc-tAg 小鼠T淋巴細胞瘤(SV40T抗原轉染)
傳代方法:
收(shou)到細胞后,取出培養瓶在(zai)倒置顯微鏡下觀察(cha)細胞生長情況。
(一)如果(guo)細胞未長滿,用75%酒(jiu)精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺(tai)內,嚴格(ge)無菌操作,打開(kai)細胞培養瓶,吸出培養液,僅留下10ml培養液在瓶內繼(ji)續培養。
(二)如(ru)果(guo)細胞已長滿,即可進行傳代培養。具體步驟如(ru)下:
1. 棄去培養液,用(yong)PBS(不含鈣,鎂(mei)離子)洗1-2次(ci)。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于(yu)培養瓶(ping)中,倒(dao)轉放于(yu)37度(du)培養箱1-3分(fen)鐘預(yu)熱(re),然后又將培養瓶(ping)倒(dao)轉大約30秒后,在倒(dao)置顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)消化情況,若細(xi)胞(bao)大部(bu)分(fen)變圓分(fen)散,輕敲幾下(xia)培養培養瓶(ping),細(xi)胞(bao)隨即脫落下(xia)來。
3. 加入6-8ml*培(pei)養基,吸出(chu),分到新的培(pei)養瓶(ping)中。一(yi)傳(chuan)二。
注意:傳代后(hou)一半用我們(men)(men)的(de)培(pei)養基,一半用你(ni)們(men)(men)的(de),以免細胞不適應而(er)造
成生長不好。
凍(dong)存(cun)方(fang)法: 凍(dong)存(cun)液:95%*培養液,5%DMSO
儲存:液氮儲存
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