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PC9 人肺癌細胞培養條件:
*培養基(ji):DMEM高糖培養基(ji)90%;胎牛血(xue)清10%。
培(pei)養條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
PC9 人肺癌細胞傳代方法: 收(shou)到細(xi)胞(bao)后,取出培養瓶在倒置顯微鏡(jing)下觀察細(xi)胞(bao)生長情況。
(一)如果(guo)細(xi)胞未長滿,用75%酒(jiu)精噴灑整(zheng)個瓶(ping)(ping)消毒后放到超(chao)菌臺內(nei),嚴格無菌操作,打開細(xi)胞培(pei)養瓶(ping)(ping),吸出培(pei)養液,僅留下10ml培(pei)養液在瓶(ping)(ping)內(nei)繼續培(pei)養.
(二(er))如果細(xi)胞(bao)已長(chang)滿,即(ji)可(ke)進行傳代(dai)培(pei)養。具體步驟(zou)如下:
1. 棄去培養液,用PBS(不(bu)含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于(yu)培(pei)養瓶中,倒轉放于(yu)37度(du)培(pei)養箱1-3分鐘預熱,然后(hou)又將(jiang)培(pei)養瓶倒轉大(da)約30秒(miao)后(hou),在(zai)倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察細胞(bao)消化情況,若細胞(bao)大(da)部(bu)分變圓(yuan)分散,輕敲幾(ji)下(xia)培(pei)養培(pei)養瓶,細胞(bao)隨即(ji)脫落(luo)下(xia)來。
3. 加入6-8ml*培養基,吸出,分到新的培養瓶中。1:3~1:6傳代;2~3天1次。
。
注意:傳代后一(yi)半(ban)用我們(men)的培養基,一(yi)半(ban)用你們(men)的,以免細胞不適應而造
成生長不好。
凍(dong)(dong)存方法: 凍(dong)(dong)存液:基礎培養基+5%DMSO+20%FBS 。
儲存:液氮儲存.
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